论文部分内容阅读
第一部分粉尘螨变应原Der f2的原核表达和纯化
目的：建立wt Der f2和mu Der f2蛋白质高效表达和纯化的平台，制备得到具有天然活性的wt Der f2和IgE低反应性的mu Der f2。
方法：在BL21(DE3)工程菌中以包涵体形式表达wt Der f2和两对二硫键缺失的mu Der f2蛋白质。粗提的包涵体溶解于含有尿素的缓冲液，以Sephacryl S-100HR柱色谱使rDer f2复性。通过ELISA和皮肤点刺试验比较wt Der f2、mu Der f2与slgE的反应能力。
结果：通过重组的pBV220质粒，rDer f2以包涵体形式得到高效表达。rDer f2过Sephacryl S-100HR色谱柱后，获得较好的复性。ELISA和皮肤点刺试验表明， wt Derf2与患者血清中的slgE反应较强，而mu Der f2的反应能力明显降低。
结论：1．高效表达和纯化wt Der f2和mu Der f2蛋白质的平台已建立，表达的wt Der f2蛋白质可以用来诊断和特异性免疫治疗过程中变应原的标准化。2．Cys8-Cys119和Cys73-Cys78之间所形成的两对二硫键对Der f 2与IgE的结合力有着重要影响。
第二部分Der f2重组蛋白应用于变应性鼻炎患者血清ELISA检测
目的：以wt Der f2作为固相包被抗原，建立间接ELISA法，检测常年变应性鼻炎患者血清特异性IgE浓度。
方法：经过皮肤点刺试验证明的24个粉尘螨反应阳性血清和2个阴性血清作为IgE血清样本。wt Der f2固相包被酶标板，HRP标记的抗人IgE单抗作为第二抗体组成测试系统来分析特异性IgE。
结果：实验结果表明，间接ELISA系统检测灵敏度为0.73 IU/ml。在4 IU/ml、12IU/ml、22 IU/ml浓度，批内重复性和批间重复性分别为9.5％，7％，6.1％和12.8％，9.1％，7.2％。24例皮试阳性患者血清经ELISA分析，有22例阳性。
结论：以wt Der f2作为固相包被抗原的间接ELISA法可用来对患者血清slgE作定量或定性分析，有助于常年性变应性鼻炎的实验诊断。
第三部分 Der f2重组蛋白致敏的豚鼠变应性鼻炎模型
目的：分析Hartley豚鼠对 wt tDerf2、mu Derf2和粉尘螨浸取液的免疫反应，建立豚鼠变应性鼻炎模型。
方法：分组的豚鼠分别以wt Der f2、粉尘螨浸取液腹腔注射后，以雾化吸入和滴鼻方式致敏。以生理盐水作为对照，比较三组豚鼠鼻粘膜和肺组织中病理改变。
结果：wt Der f2、粉尘螨浸取液通过鼻腔致敏后，均能诱导豚鼠鼻粘膜和肺组织中的炎症细胞浸润以及皮肤变应反应。
结论：
1．建立了粉尘螨致敏的豚鼠变应性鼻炎模型。
2．wt Der f2能够使豚鼠致敏，与粉尘螨浸取液致敏豚鼠的反应相同。