马铃薯试管薯快繁及其调控机理研究

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离体条件下诱导形成马铃薯试管薯是脱毒种薯生产的重要环节,且有利于种质资源的交换和保存,同时也是研究马铃薯块茎形成和碳水化合物代谢的适宜系统,还是基因转化的良好受体。本论文在建立试管苗和试管薯离体诱导培养体系基础上,对马铃薯试管薯离体快繁的影响因素及其调控机理进行了研究,同时还以马铃薯离体试管苗和试管薯为实验模式,对盐胁迫条件下马铃薯植株和块茎形成发育进行了模拟研究。主要研究结果如下: 1.三种试管薯培养体系比较研究结果表明:液体诱导培养,成薯指数大,试管薯产量高,不使用琼脂,相对节约成本,是当前马铃薯试管薯脱毒快繁的主要方式。固液双层诱导培养,程序简便,成薯指数和试管薯产量较高,具有更大的生产潜力,可根据其特点,进一步研究以提高产量。固体直接诱导培养结薯时间短,试管薯之间差异小,成熟整齐一致,易于准确判断其发育时期,其作为实验手段,是研究块茎形成及碳水化合物代谢的一个理想体系。从研究角度出发,应主要采用两种培养体系,即固液双层诱导培养和固体直接诱导培养。基本诱导培养基成分为:MS+500mg/L CCC+5 mg/L BAP+8%蔗糖,PH=5.8。固体培养加7.5g/L琼脂。培养容器为250ml广口瓶,接种密度10株/瓶。温度20±1℃,黑暗诱导培养时间固液双层诱导体系为60-80d,固体直接诱导培养体系为30-40d。 2.光温条件对试管薯形成和产量研究结果表明:克新1号和荷兰无花两个马铃薯品种试管薯的形成在低温(17℃)下较为合适,而结薯后的块茎在25℃下生长比17℃快。克星1号在黑暗条件下诱导结薯产量较高,而荷兰无花在8小时光照下较好。试管薯块茎内叶绿素含量的高低主要受光周期的影响。随着光周期的延长,块茎中叶绿素含量逐渐增加,颜色变绿,在同温、同光照条件下,两2个品种试管薯内产生的叶绿素b含量均大于叶绿素a含量。17℃下两2个品种叶绿素含量累积均高于25℃下累积量。 3.通过正交设计对培养基中营养成分变化对试管薯的形成和产量影响进行研究。结果表明:在原标准MS诱导结薯培养基基础上增加磷酸二氢钾和氯化钙浓度,降低氯化镁浓度,即硝酸氨1650mg/L、硝酸钾1900mg/L,氯化钙440mg/L,硫酸镁185mg/L,磷酸二氢钾255mg/L能显著提高试管薯结薯数量、平均直径和鲜重。微量元素中,锰和铁对试管薯产量影响程度最大,硼次之,铜和锌影响相对较小。在原MS基础上,锰增加0.5倍,铁增加一倍,硼不变,铜锌减半,即改进配方为:MnSO4·4H2O,25.35mg/L;FeSO4·7H2O,55.6mg/L;H3BO3,6.2mg/L;CuSO4·5H2O,0.0125mg/L;ZnSO4·7H2O,4.3mg/L可显著增加产量,并降低生产成本。 4.多种外源激素对试管薯的调控效果研究结果表明:1)随IAA浓度(0.5-10mg/L)的提高,试管苗高度、根数、根长和茎叶鲜重都显著增加,GA和IAA互作增强了这个效果。BAP在块茎形成中具有非常重要的作用,而且在试管苗茎切段末端诱导产生棕色愈伤组织。IAA还有利于无柄薯的形成。随IAA浓度(2.5-10mg/L)的提高,试管薯鲜重和直径都显著增加,10mg/L IAA浓度下,IAA+GA+BAP处理的试管薯鲜重和平均直径分别为IAA+BAP处理的409.6%和184.4%,表明了GA和IAA在马铃薯块茎形成中的互作效果。2)0.1-1mg/L多效哇处理完全抑制了MS扩繁培养基中马铃薯试管苗的生长,而0.olm留L多效哇处理虽抑制了试管苗茎叶的生长,但叶色加深、根重和根长显著增加。0.lm泌多效l坐处理促进了马铃薯品种夏波蒂提早结薯,使单瓶试管薯鲜重、平均直径和单薯鲜重都显著增加,同时减低畸形薯率。该多效哇使用浓度仅为矮壮素(c cC)的1/5000,且能提高试管薯产量和质量,有利于降低残留并节约成本,是矮壮素较好的替代物之一。3)0.2一Zm留L茉莉酸处理对马铃薯品种费乌瑞它和荷兰无花的茎叶鲜重和根长、根数的生长均表现为促进作用,而大于20m叭浓度处理则显著抑制了试管苗?茎叶和根的生长。试管苗叶片中叶绿素含量随茉莉酸处理浓度增加而减少,0.2m妙茉莉酸处理有利于试管苗叶片中的过氧化物酶的活性增加,而Zm眺以上浓度茉莉酸处理使过氧化物酶活性降低。黑暗条件下,不同浓度茉莉酸处理对马铃薯品种荷兰无花和静薯2号的结薯数量、鲜重和大薯率都没有显著提高。4)培养基中加入适量AgN03可抑制乙烯的合成,显著增加试管苗的根长和叶面积,增加试管薯的鲜重,但过量硝酸银会对试管苗生长造成伤害,也降低了试管薯产量。马铃薯品种东农303和兰芽分别在7.5和4.5m叭AgNo:浓度处理下,试管薯产量最高。 5.应用Y一射线对马铃薯试管薯进行诱导,结果表明:用4 Gy的丫一射线对马铃薯试管苗进行处理,不仅使夏坡蒂和大西洋两个品种单瓶试管薯的平均结薯数量比对照分别增加1 16.7%和34.5%,而且使试管薯的平均鲜重分别提高77.6%和23.2%。两个品种的试管薯经辐射诱导后结薯期比对照均提前了5天左右,但在块茎形成和发育过程中,两个品种对辐射剂量呈现出不同的适应能力,表明辐射对试管薯形成和发育的影响存在一定皎基因型差异。 6.以离体试管苗和试管薯发育为模式,对马铃薯耐盐胁迫生理进行了?
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