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细胞程序性死亡配体(PD-Ls,即PD-L1和PD-L2)能与相应的受体结合来传递信号,从而在维持免疫耐受等方面发挥重要作用。本研究通过原核和真核细胞表达人PD-Ls胞外段与人IgG1 Fc(铰链区-Fc)段的融合基因PD-L1-Fc、PD-L2-Fc及PD-L1-Fc-PD-L2,并对PD-Ls-Fc融合蛋白的生物学效应进行初步研究,为进一步探索PD-Ls-Fc分子的功能及其临床应用奠定基础。方法:通过 PCR 获得 PD-L1-Fc、PD-L2-FC 及 PD-L1-Fc-PD-L2 基因;构建原核重组质粒并转化至Rosetta表达菌中,IPTG诱导PD-Ls-Fc蛋白表达,Western Blot法检测融合蛋白在大肠杆菌中的表达;构建真核重组质粒,通过三质粒系统共转染293T细胞,包装出具感染性的慢病毒,接着用浓缩后的病毒感染293T细胞,经嘌呤霉素筛选、有限稀释,得到能稳定表达PD-Ls-Fc蛋白的单克隆细胞株,并用RT-PCR、Dot-blot、Western Blot等多种方法定性鉴定;采用亲和层析技术分离纯化上述蛋白,;用Elisa法检测原核表达的PD-Ls-Fc蛋白与细胞程序性死亡受体1(PD-1)蛋白的结合情况;通过CCK检测PD-Ls-Fc蛋白对活化Jurkat T细胞增殖的影响。结果:1、成功构建原核重组质粒 pET-27b-PD-L1-Fc、pET-27b-PD-L2-Fc 和pET-27b-PD-L1-Fc-PD-L2,对应的菌株经IPTG诱导后能表达相应的目的蛋白,可从1L菌液中获得约15mg纯化的重组蛋白。2、成功构建慢病毒重组质粒 pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-Puro-PD-Ls-Fc;通过筛选得到能稳定表达PD-L1-Fc蛋白的293T/PD-L1-Fc细胞株,以及能稳定表达PD-L2-Fc蛋白的293T/PD-L2-Fc细胞株,可从1L细胞培养上清液中纯化出约0.3mg的重组蛋白。3、Elisa检测结果表明,原核表达的PD-Ls-Fc蛋白能在一定程度上与PD-1蛋白结合。4、细胞增殖实验表明,无论是原核还是真核表达的PD-Ls-Fc蛋白都能抑制活化JurkatT细胞的增殖,但与真核表达的蛋白相比,原核表达的蛋白需要使用更多的剂量才能显著抑制活化Jurkat T细胞的增殖。结论:PD-Ls-Fc基因能在原核及真核表达系统中成功表达,表达的PD-Ls-Fc蛋白能抑制活化JurkatT细胞的增殖,说明这些蛋白具有一定的生物活性,为更加深入探讨PD-Ls-Fc的生物学功能提供了材料。