目的:在配制出不同浓度的热敏水凝胶聚乳酸羟基乙酸-聚乙二醇-聚乳酸羟基乙酸聚合物(PLGA-PEG-PLGA)中选择出合适的浓度,检测其细胞毒性确认其作为生物材料的安全性.然后在其内部以物理混合的方式装载血管内皮生长因子(VEGF),建立成具有缓释功能的载药体系。构建标准化的wistar大鼠下肢缺血模型,给予装载VEGF的热敏水凝胶,利用激光多普勒观察大鼠下肢缺血肢体的血流恢复状况。方法:(1)将PLGA-PEG-PLGA溶解于PBS中,配置不同浓度的热敏水凝胶PLGA-PEG-PLGA在根据溶液-凝胶转变温度,选取合适的浓度装载VEGF。(2)将选取好的PLGA-PEG-PLGA与脐静脉内皮细胞共同培养,在不同时间点用酶标仪测量器吸光度,分析PLGA-PEG-PLGA的细胞毒性。(3)wistar大鼠标准化下肢缺血模型的建立,左下肢股总动脉、股浅动脉及隐动脉结扎并离断切除其动脉分支。(4)将成功建模的下肢缺血模型的20只wistar大鼠随机分为Gel/VEGF组、Gel组、VEGF组、生理盐水的Control组,在缺血模型建立后第1天,在缺血下肢腓肠肌分别肌注200ul Gel/VEGF、Gel、VEGF、生理盐水。用Moor LTD激光多普勒血流仪分别记录各分组0d、1d、3d、7d、10、14d的大鼠双下肢血流灌注情况,并用血流灌注比(缺血侧/非缺血侧)反映大鼠下肢血流恢复情况。(5)激光多普勒血流灌注比分析结束后处死wistar大鼠并留取缺血下肢腓肠肌标本,进行HE染色和免疫荧光分析缺血组织的毛细血管数。结果:(1)通过对三种不同浓度PLGA-PEG-PLGA(1654-1500-1654)的研究得出。当水凝胶的浓度为别为15%wt、20%wt和25%wt时,水凝胶溶液表现出来的凝胶转变温度分别为:29.1oC、26.9oC、23.1oC,沉淀转变温度分别为:37.7oC、39.3oC、42.9oC。由此可以看出当水凝胶聚合物浓度越高时,其由溶液向凝胶转变所需的温度也就越低,但其向沉淀转变所需的温度也越高。VEGF和PLGA-PEG-PLGA水凝胶能以物理混合的方式构建缓释体系,并能在体外释放VEGF达9d左右。(2)CCK8细胞毒性试验和组织HE染色分别从细胞层面和组织层面表明PLGA-PEG-PLGA水凝胶具有良好的生物安全性,可作为生物可降解材料用于实验。(3)激光多普勒血流灌注分析注射Gel/VEGF组的大鼠缺血下肢能在14d后血流灌注比恢复到87.61%,和对照组两两相比P<0.05,结果有统计学意义。观察Gel/VEGF组的缺血侧腓肠肌的HE切片,可以看出其缺血侧的肌细胞形态更接近于非缺血侧,同时相较与其他三组其组织间隙也更加的小。缺血侧的腓肠肌免疫荧光双标CD31和α-SMA检测证明给与Gel/VEGF组相较于其他三组有更多的微血管生成。结论:(1)热敏水凝胶PLGA-PEG-PLGA可以作为缓释材料装载VEGF构建药物缓释体系,是因为该材料具有可降解的特性以及优越的生物相容性。(2)构建成功的热敏水凝胶缓释体系对大鼠缺血下肢血流恢复有一定的促进作用。