【摘 要】
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目的:本研究拟在缺氧环境下,采用不同浓度的BaP处理A549细胞,探讨BaP对分子伴侣介导自噬(CMA)的作用是否与HSP90有关。方法:(1)采用CoCl_2构建细胞缺氧环境,qPCR法检测HIF-1α的mRNA表达,确定缺氧环境是否构建成功;(2)采用qPCR和Western bolt法检测缺氧环境对A549细胞中HIF-1α、HSP90、HSC70和LAMP-2A的mRNA和蛋白表达影响;(
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目的:本研究拟在缺氧环境下,采用不同浓度的BaP处理A549细胞,探讨BaP对分子伴侣介导自噬（CMA）的作用是否与HSP90有关。方法:（1）采用CoCl2构建细胞缺氧环境,qPCR法检测HIF-1α的mRNA表达,确定缺氧环境是否构建成功;（2）采用qPCR和Western bolt法检测缺氧环境对A549细胞中HIF-1α、HSP90、HSC70和LAMP-2A的mRNA和蛋白表达影响;（3）采用qPCR和Western bolt法检测不同浓度BaP对缺氧环境下A549细胞中HIF-1α、HSP90、HSC70和LAMP-2A的mRNA和蛋白表达影响;（4）采用qPCR和Western bolt法检测BaP对缺氧环境下给予HSP90抑制剂Geldanamycin（GA）和沉默HSP90α的A549细胞中HIF-1α、HSP90、HSC70和LAMP-2A的mRNA和蛋白表达情况;（5）采用碱性彗星实验、免疫荧光检测γ-H2AX焦点实验、qPCR和Western bolt法检测不同浓度BaP对A549细胞中DNA损伤与细胞内HSP90、HSC70和LAMP-2A的mRNA和蛋白表达的影响,进一步探讨DNA损伤与CMA的关系。结果:（1）与常氧组比较,A549细胞在不同时间缺氧后,HIF-1α的mRNA表达量均有一定程度的增加,以缺氧24h后HIF-1α的mRNA表达量最高,差异具有统计学意义（P<0.001）;（2）缺氧环境下,HIF-1α、HSP90、HSC70和LAMP-2A的mRNA和蛋白表达量与常氧组相比均明显增加,差异具有统计学意义（P<0.05）;（3）缺氧环境下,1μM BaP作用于A549细胞24h时,HIF-1α、HSP90、HSC70和LAMP-2A的mRNA和蛋白表达量均显著降低,与空白组比较差异具有统计学意义（P<0.05）;（4）缺氧环境下,给予GA和沉默HSP90α的A549细胞可以增强BaP对HIF-1α、HSP90、HSC70和LAMP-2A的mRNA和蛋白表达量的抑制作用,与BaP组相比差异具有统计学意义（P<0.05）;（5）常氧环境下,不同浓度BaP作用于A549细胞24h时,细胞内DNA单、双链断裂的损伤程度及HSP90、HSC70和LAMP-2A的mRNA和蛋白表达量均随着BaP浓度的增加而增加,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:1.缺氧可以促进A549细胞的CMA;2.在缺氧环境下,BaP对CMA有抑制作用;3.在缺氧环境下,HSP90抑制剂和沉默HSP90α的A549细胞可以增强BaP对CMA的抑制作用;4.在常氧环境下,BaP可以导致DNA损伤和CMA相关。
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