不同品种烟草忍耐镉的机制研究

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镉是环境中迁移性和毒性最强的重金属元素之一。烟草是一种富集和转运镉能力较强的经济作物,对于Cd对烟草的毒害已有研究,但对不同品种烟草对镉胁迫的生理生化响应差异研究较为缺乏,对产生差异的关键调控机制仍不清楚。本研究以镉耐性不同的烟草品种Nicotina tabacum L.var.Xanthi和Nicotina tabacum L.vat.Guiyanll为材料,研究Cd对不同品种烟草植株生长、积累和运输的差异,对营养元素运输和分布的差异,探讨不同品种烟草植株应答环境镉胁迫的生理学差异的机制;通过对不同品种烟草根和地上部的镉亚细胞分布差异,研究烟草细胞区室化机制;通过对烟草根尖基因表达谱变化的测定,研究烟草应答镉胁迫可能的生理代谢途径及其调控机理,为探索植物对Cd抗性的生理和分子机制提供参考,对土壤镉污染修复具有重要意义。研究表明:两个品种烟草生长对镉胁迫的反应不同,Xanthi的生长对Cd的反应有明显的剂量效应,较强的耐受Cd胁迫能力,而Cd却抑制Guiyanll生长,说明Xanthi对Cd的忍耐能力较Guiyanll强;不论是Xanthi还是Guiyanll,也不论是促进还是抑制,根的表现均较地上部明显,可以得出根是反应相对敏感的部位。不同品种烟草对镉的富集及转运差异研究表明,根有积累Cd并阻止向地上部运输的忍耐能力,这种组织区域化的忍耐机制,Xanthi表现更为突出;随Cd胁迫的加强,两品种根含Cd量均增加,但Xanthi增加的幅度高于Guiyanll,说明Xanthi单位重量的Cd积累更强;烟草地上部Cd含量基因型间存在极显著差异,Xanthi的含Cd量显著高于Guiyanll,而根部Cd含量基因型间差异不显著。随着Cd处理浓度加大,两个品种烟草镉的转运率降低,Xanthi根的区域化表现较Guiyanll明显,这也许是Xanthi能够忍耐更高浓度的Cd胁迫的原因之一。Cd能够抑制Xanthi的伤流量,降低木质部的运输速率,而贵烟提高11号的运输速率。随着Cd处理浓度的增加,Xanthi和Guiyanll的伤流液中Cd运输量是逐渐增加的,相对于对照来说,Guiyanll向地上部运输Cd的速率大于Xanthi。Cd处理对两品种的Ca、Mg的运输均有抑制作用,低浓度Cd对Xanthi中K的运输有促进作用,而高浓度Cd对K的运输有抑制作用,Cd胁迫对K、Ca、Mg的运输的影响品种间均存在显著或极显著差异。镉对不同品种烟草营养元素分布的影响研究表明,在Cd影响下烟草对常量元素、微量元素的分布出现变化,且两品种表现不同。低剂量Cd促进两品种烟草根部S含量显著增加,可能是植物缓解Cd毒害的重要方式之一;Cd通过对不同品种烟草体内微量元素分布的影响,阻碍体内正常生理活动进行,进而影响生长发育。镉对不同品种烟草DNA的损伤研究表明,烟草DNA提取后的颜色是随着处理时间的延长而逐渐加深的,从白色-棕色-深棕色-黑色,Guiyanll对Cd更加敏感,受Cd的毒害更严重;25μmol/L Cd2+的胁迫能损伤烟草根尖DNA,随处理时间的延长DNA不断降解,且处理时间越长,降解程度越大,降解的片断越小。两品种在25μmol/LCd2+处理时间72h后的降解程度最为明显;不同Cd处理浓度对烟草DNA的影响不同,Cd处理浓度越大,降解的程度就越大。不同品种烟草叶片抗氧化酶系统对镉胁迫的响应研究表明,随着土壤Cd浓度的增加,两品种叶中的MDA变化趋势一致,均是先增加后降低,但Xanthi MDA含量高于Guiyanll,两品种存在极显著差异;Cd胁迫两烟草品种的SOD变化有极显著差异,Xanthi的SOD酶活性较高,说明Xanthi能够维持较高的SOD活性;两品种的POD变化也有明显差异,高浓度Cd长期处理能够让Xanthi维持更高的POD活性,而Guiyanll的POD活性则是随Cd浓度的增加而降低的,这也许是Xanthi耐Cd的又一个重要生理机制;Cd对CAT变化两品种间也具有显著差异,低Cd处理均使两品种烟草的CAT活性降低,但高Cd胁迫下,Xanthi的CAT活性陡增,而Guiyanll却在继续下降,说明CAT也是Xanthi镉的重要生理机制之一。综合SOD、POD、CAT三种酶活性来看,在低土壤Cd浓度长期胁迫下,SOD在Xanthi和Guiyanll的抗氧化系统中扮演重要角色,但在高土壤Cd浓度长期胁迫下,POD和CAT在Xanthi在抗氧化系统中具有至关重要的作用,且这种作用很可能是Xanthi耐镉的重要生理机制,而Guiyanll的POD和CAT表现均不明显。镉对不同品种烟草蛋白质的影响研究表明,两品种叶片中可溶性蛋白品种间差异不显著,Guiyanll变化不大,而Xanthi在3mg/KgCd时显著下降,在10mg/KgCd时浓度上升,并超过对照,有可能是不溶的大分子的蛋白质分解为可溶的蛋白质而得,表明Cd对烟草蛋白质的影响是很复杂的,跟处理浓度和烟草品种有关。比较此两种品种,Xanthi的解毒能力更强。两烟草叶片的蛋白质谱带均有变化且变化不同,镉胁迫下Xanthi根蛋白质电泳图中蛋白质带谱主要是弱化和缺失,新增蛋白质几乎没有观察到,在Guiyanll的蛋白质电泳图中,在低Cd处理下(5μmol/L Cd2+)就发生了蛋白质的新增(120KD)和缺失(50KD),说明Guiyanll根部比Xanthi的反应更明显。Cd能够诱导烟草新蛋白的生成和某些蛋白质的缺失和弱化,新的蛋白很可能与Cd结合起到缓解Cd毒害的作用。在亚细胞分布中,细胞壁是主要的Cd分布的场所,且Xanthi细胞壁对Cd的阻隔作用比Guiyanll强,能有效阻止Cd对细胞器的破坏,Xanthi细胞区室化机制体现更明显。除细胞壁对Cd的阻隔作用外,在根中Cd主要分布在细胞器中,而叶片主要集中于可溶部分,且两品种烟草表现不同。Cd在Xanthi叶片中细胞器和可溶部分的比例相当,而Cd在Guiyanll叶片中可溶部分占的比例相对较大,是细胞中除细胞器外的主要Cd分布区域。而可溶部分主要来自于细胞质和液泡,说明在Guiyanll叶片中,液泡是Cd亚细胞分布中除细胞壁外的重要场所。
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