论文部分内容阅读
目的:探索脑缺血再灌注时自噬的作用及给予盐酸戊乙奎醚对其的影响方法:清洁级SD大鼠54只,体重250-280g(兰州大学基础医学院动物实验中心提供)。随机数字表法分为3组(n=18):假手术组(Sham组);缺血再灌注组(I/R组);盐酸戊乙奎醚组(PHC组)。I/R组与PHC组均使用线栓制作右脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,按照Zea Longa神经功能缺失评分法1-3分界定为模型成功。缺血1.5 h后抽出线栓,Sham组在模型成功后1h从尾静脉推注0.9%NS1ml;I/R组于脑血管再通前30分钟从尾静脉推注0.9%NS 1ml;PHC组同样的时间点推注盐酸戊乙奎醚0.2mg/kg稀释到1ml。于再灌注后24h后分别再进行神经功能评分;2%TTC染色脑组织测定含水率及梗死率;Western Blot法测自噬表达Beclinl、Atg5、LC3II/I;免疫荧光双染色观察海马CA1区组织学变化,收集数据并进行统计学分析。结果:1、大鼠神经功能缺损评分:缺血1.5h后,I/R和PHC两组神经功能缺损评分均降低,与Sham组对比,差异有统计学意义(P<0.01);1.5h时I/R组和PHC组评分无统计学意义。再灌注24h后,I/R和PHC两组神经功能缺损评分对比Sham组较低,差异有统计学意义(P<0.01),PHC组比I/R组的神经功能缺损评分低,差异有统计学意义(P<0.01)。2、脑组织含水率:组织发生水肿可以体现组织损伤的严重水平。再灌注24h后,I/R组脑组织水肿较Sham组严重,含水率差异有统计学意义(P<0.01);PHC组脑组织水肿减轻,含水率对比Sham组减少,差异有统计学意义(P<0.01);PHC组较I/R组有下降,差异有统计学意义(P<0.01)。3、TTC染色及脑梗死率:再灌注24h后,I/R组与PHC组发生脑梗死;PHC组脑梗死范围较I/R组减小,差异有统计学意义(P<0.01)。4、Western Blot检测结果:与Sham组相比,I/R组Beclin1升高,差异有统计学意义(P<0.01);PHC组Beclin1较Sham组仍高,差异有统计学意义(P<0.01);PHC组较I/R组Beclin1显著增高,差异有统计学意义(P<0.01)。Atg5是重要的自噬中间产物。与Sham组对比,I/R组Atg5表达增多,但无统计学意义(P>0.05);PHC组Atg5较Sham组表达量增高明显,差异有统计学意义(P<0.01);PHC组较I/R组Atg5表达增高明显,差异有统计学意义(P<0.01)。LC3II/I可以动态的反应自噬的过程。与Sham组相比,I/R组自噬流增高LC3II/I升高,差异有统计学意义(P<0.01);PHC组较Sham组LC3II/I更高,差异有统计学意义(P<0.01);PHC组较I/R组自噬流被激活放大,LC3II/I比值增高,差异有统计学意义(P<0.01)。5、免疫荧光染色结果:缺血再灌注24h后Sham组Beclin1、Atg5均有低剂量表达;与Sham组相比,I/R组Beclin1、Atg5表达增多,而PHC组较I/R组又增多。Sham组可以看到CA1区锥体细胞核排列致密规律、核边界清晰,胞核饱满,有两到三层胞核;I/R组细胞核排列松散,大部分细胞核崩解,形态异常,单位面积内细胞核数锐减,与Sham组对比差异有统计学意义(P<0.01);PHC组细胞层次尚完整,部分细胞崩解,单位面积内细胞核数有减少,与Sham组对比差异有统计学意义(P<0.01);但正常形态的胞核数多于I/R组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:1、脑缺血再灌注时脑组织发生损伤,自噬被激活,神经功能缺损评分降低,脑水肿加重,脑组织缺血区发生梗死;2、给予PHC后自噬效果被放大,但脑组织损伤减轻,神经功能缺损评分部分恢复,脑水肿减轻;这种作用可能与上调Beclin1、Atg5的表达,激活自噬流有关;3、发生脑缺血再灌注损伤时尽早给予PHC,可上调自噬,减轻脑水肿改善脑功能评分,发挥脑保护作用。