基于毒效关联的远志炮制工艺研究

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中药历史悠久,也是世界传统医学的重要组成部分,中药化学成分的多样性决定了其药理作用和临床疗效的多样性,同时也导致一部分中药具有不同程度的毒性。而中药炮制作为中医临床用药的重要环节,其主要目的是“减毒增效”。中药如何经炮制后在临床上发挥最佳疗效,一直是众多学者潜心研究的课题。远志作为传统中药,具有安神益智、祛痰、消肿等功效,同时也具有一定的胃肠毒性,因此,临床用药一般选用其炮制品,达到“减毒增效”的效果,最大限度地发挥其药用价值。远志炮制方法较多,目前常以辅料炮制为主,其中甘草制远志是目前临床应用较多的炮制品,为中国药典所收载,但其具体炮制工艺参数不明确。为规范远志炮制工艺,确保临床用药有效,需要利用现代科学技术手段探究甘草制远志最佳炮制工艺,为其炮制工艺的优化提供科学数据支撑和指导。因此,本论文选用甘草制远志作为研究对象,利用L9(3~4)正交试验法结合超高效液相色谱-三重四极杆-串联质谱(UPLC-MS/MS)定量分析对远志炮制工艺进行优选,并从细胞水平和动物水平层面,以减毒增效双重角度对最优炮制工艺进行验证,最终确定甘草制远志的最佳炮制工艺。主要研究内容如下:1.甘草制远志炮制工艺研究及含量测定采用L9(3~4)正交试验法,选取甘草用量、煎煮用水量和炒制功率作为考察因素,共炮制27批样品,结合UPLC-MS/MS技术和Waters Mass Lynx 4.1数据处理系统,考察了不同炮制工艺对远志中7种指标性成分含量变化的影响,并对其进行分类、定量分析和正交验证实验,利用SPSS软件对数据进行统计分析,最终优选出甘草制远志的最佳炮制工艺为:甘草12 g,加水适量,煎煮两次,去渣,合并滤液并浓缩至40 m L,加入净远志100 g,焖润30 min后,300 W功率下用电磁炉炒至汤吸尽,取出,干燥。2.基于Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤模型评价不同远志炮制品的体外活性利用Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤模型,在细胞层面对阿尔兹海默症(Alzheimer disease,AD)进行了体外活性评价。观察生远志及其不同炮制品对Aβ25-35所致的PC12神经细胞损伤的保护作用,并结合正交试验结果进行统计学分析,从增强药效角度初步验证最优炮制工艺确定的科学性。结果表明,A2B2C3条件下远志炮制品(炮制品5)保护作用最好,远志炮制品1保护作用最弱,结合统计学分析结果,确定A2B2C3为最佳炮制工艺。3.甘草制远志治疗阿尔兹海默症的药效学评价本章在细胞水平评价结果的基础上,在动物层面对生远志及不同炮制工艺下的远志炮制品5和远志炮制品1进行了药效学评价。利用大鼠阿尔兹海默症(AD)模型,采用Morris水迷宫实验,通过HE染色、免疫组织化学及生化指标测定对其学习记忆能力和组织病理学等方面进行考察。结果表明,P5组作用最佳,其次是P1组和远志生品组。4.不同远志炮制品的毒性评价降低毒性是有毒中药炮制需要考察的最为重要的指标之一,因此,本章利用小鼠急性毒性实验和胃肠毒性实验,对生远志及不同炮制工艺下的远志炮制品5和远志炮制品1进行毒性评价,探究远志炮制前后的毒性变化,从降低毒性角度进一步验证最优炮制工艺确定的科学性。结果表明,生远志具有较为强烈的急性毒性和胃肠毒性,经炮制后毒性有所降低,其中P5组毒性最低。综上,本论文以远志指标性成分含量变化为考察指标,确定了最优的远志炮制工艺,并进一步从减毒增效双重角度初步验证了所选炮制工艺的合理性、可行性和科学性,从而为甘草制远志炮制工艺的优化提供了科学数据支撑。
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