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进一步研究脊髓缺血再灌注(Ischemia/Reperfusion;I/R)损伤过程中与神经再生相关上调蛋白变化特点及其作用机制,从而为寻找脊髓I/R损伤特异性诊断/治疗新靶点奠定坚实基础。本文以急性脊髓I/R损伤兔模型为研究对象，并以其损伤节段腰髓为研究对象，应用差异蛋白组学双向电泳（DIGE）分析比较再灌注0、12、24、48h时间点脊髓蛋白表达变化，成功获得各个时间点的差异蛋白，整合应用免疫组化和免疫印迹分析方法对筛选出特异上调2倍以上的神经类蛋白质及其磷酸化修饰蛋白进行鉴定及功能分析。研究结果表明：在各损伤时间点脊髓组织中α-微管蛋白（α-tubulin）、神经丝蛋白－M（NF-M）和神经丝蛋白－L（NF-L）分别定位于神经元细胞膜、轴突及细胞浆中；其中在脊髓灰质、白质及前后角分布中，脊髓灰质较白质表达量增加（P＜0.05）；脊髓前角和后角区域表达量未见明显差异（P＞0.05）。发现三种蛋白表达量随脊髓再灌注时限的延长具有依从性递增，而在脊髓再灌注24h达到峰值，后逐渐回归至脊髓再灌注初始水平，前期实验我们发现NF-M、NF-L可能发生了磷酸化修钸，其磷酸化蛋白与未磷酸化NF-M、NF-L蛋白表达量变化呈平行关系。结论：α-tubulin、NF-M和NF-L蛋白对损伤脊髓神经元具有保护和修复作用，其作用机制可能是通过修复神经元细胞膜、促进轴突再生途径参与脊髓I/R损伤的保护，NF-M和NF-L蛋白对I/R损伤脊髓保护作用我们推测可能是通过其蛋白磷酸化修饰来实现。本论文的贡献：我们应用蛋白质组学整合免疫组化、免疫印迹分析方法对脊髓I/R损伤过程中2倍以上上调蛋白进行了鉴定与功能分析。创新性从蛋白质水平提出了上调蛋白α-tubulin、NF-M和NF-L参与脊髓I/R损伤病理演变全过程，对脊髓损伤具有重要保护和修复作用，其保护机制可能是通过修复神经元细胞膜、促进轴突再生实现，其中NF-M和NF-L蛋白参与脊髓I/R损伤保护是通过其蛋白磷酸化修饰来实现的。本实验的研究结果将为纵深阐述脊髓I/R损伤过程中保护作用新机制提供重要的科学证据，国内外未见相关报道。本论文获得国家自然科学基金的资助（批准号:30872609/H605）。