论文部分内容阅读
研究目的:（1）基于16S rDNA测序比较健康女性与多囊卵巢综合征（PCOS）患者肠道菌群的结构、丰度及多样性差异,总结PCOS患者肠道菌群的特征;（2）比较健康女性与痰湿型PCOS患者性激素、AMH、糖脂代谢指标及胰高血糖素样肽-1（GLP-1）的水平,进一步分析GLP-1与其他代谢指标的相关性,总结痰湿型PCOS患者胃肠激素与代谢的特征;（3）运用补肾化痰方干预,比较痰湿型PCOS患者治疗前后性激素、糖脂代谢及GLP-1的变化,初步阐明补肾化痰方对痰湿型PCOS患者胃肠激素及代谢障碍的作用。研究方法:（1）招募2020年1月至6月于江苏省中医院生殖医学科门诊就诊的PCOS患者12例和健康志愿者7例,收集其粪便,通过16S rDNA测序分析PCOS患者和健康人群的肠道菌群的差异。（2）招募2020年1月至2021年12月于江苏省中医院生殖医学科门诊因男方因素就诊的健康女性30例作为对照组,痰湿型PCOS患者30例作为试验组。对纳入病例计算体重指数（BMI）、腰臀比（WHR）,化学发光法检测性激素（促黄体生成素（LH）、促卵泡生长素（FSH）、LH/FSH、睾酮（T）、雌二醇（E2）、硫酸脱氢表雄酮（DHEAS）、性激素结合球蛋白（SHBG）、游离雄激素指数（FAI））、抗苗勒试管激素（AMH）、用氧化酶法、酶联免疫吸附法（ELISA）及全自动生化分析仪等检测糖脂代谢指标（空腹血糖（FPG）、空腹胰岛素（FINS）、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C））以及0min、30min、60min、120minGLP-1水平,比较两组间各项指标的差异,进一步分析GLP-1与其他代谢指标的相关性,总结痰湿型PCOS患者胃肠激素与代谢的特征。（3）予中药补肾化痰方治疗痰湿型PCOS患者3个月后再次检测以上指标,分析痰湿型PCOS患者治疗前后相关数据的差异,初步阐明补肾化痰方对痰湿型PCOS患者胃肠激素及代谢障碍的作用。研究结果:（1）与正常人群相比,PCOS组肠道菌群的α多样性指数降低,但与β多样性一样无明显统计学差异（P＞0.05）。在不同的分类水平上微生物种类和丰度上存在改变,与对照组相比,在门水平上PCOS组厚壁菌门（Firmicutes）上调,拟杆菌门（Bacteroidetes）与放线菌门（Actinobacteria）下调,但无显著差异性菌门（P＞0.05）;在科水平上的伯克氏菌科（Burkholderiaceae）和在属水平上的Subdoligranulum、霍氏真杆菌属（Eubacteriumhallii）、厌氧棒状菌属（Anaerostipes）、加德纳菌属（Gardnerella）、青枯雷尔氏菌属（Ralstonia）、克雷伯氏菌属（Klebsiella）、内酯杆菌属（Lactonifactor）和肠杆菌属（Enterobacter）,差异均具有统计学意义（P＜0.05）。（2）与正常人群相比,痰湿型PCOS患者在年龄、身高、FSH、E2方面无统计学差异（P＞0.05）。痰湿型PCOS的体重、BMI、腰围、臀围、WHR、LH、LH/FSH、T、DHEAS、FAI、AMH、FPG、FINS、HOMA-IR、TC、LDL-C、中医证候积分显著增高（P＜0.001）,TG升高也具有统计学意义（P＜0.05）,SHBG、HDL-C、糖负荷试验各时间节点的GLP-1水平明显降低（P＜0.05）,其中SHBG、HDL-C具有显著性差异（P＜0.001）。（3）痰湿型PCOS空腹GLP-1与FPG、FINS、IR值存在显著负相关性（P＜0.001）,与BMI、WHR、TC、TG、LDL-C亦存在负相关性,与HDL-C存在正相关性,但均无统计学意义（P＞0.05）。（4）补肾化痰方治疗后明显降低了痰湿型PCOS患者中医证候积分,并降低了体重、BMI、腰围、臀围、WHR、LH、LH/FSH、T、DHEAS、FAI、AMH、FPG、FINS、HOMA-IR、TC、TG及LDL-C水平,并能升高SHBG、HDL-C及各时间节点的GLP-1水平,以上差异均有统计学意义（P＜0.05）,其中LH、LH/FSH、DHEAS、AMH、FPG、FINS、HOMA-IR、中医证候积分及空腹GLP-1具有显著性差异（P＜0.001）。结论:（1）PCOS患者与对正常人群的肠道菌群结构存在一定的差异,其中PCOS组拟杆菌门（Bacteroidetes）、拟杆菌属（Bacteroides）及克雷伯氏菌属（Klebsiella）等某些革兰阴性菌水平的下调和厌氧棒状菌属（Anaerostipes）、青枯雷尔氏菌属（Ralstonia）等能够代谢产生SCFAs的菌属的上调,说明肠道菌群失调可能是影响痰湿型PCOS的发病以及其性激素、糖脂代谢紊乱等出现的重要原因。（2）痰湿型PCOS患者糖脂代谢紊乱的特征明显,主要表现在BMI升高（超重或肥胖）、胰岛素抵抗及高脂血症等方面,并且糖负荷各时间节点的GLP-1水平均明显低于对照组。（3）痰湿型POCS患者空腹GLP-1水平与FPG、FINS、IR呈负相关,与BMI、WHR、TC、TG、LDL-C亦存在负相关性,故GLP-1与痰湿型PCOS患者的糖脂代谢障碍关系密切。（4）补肾化痰方干预痰湿型PCOS患者后,明显改善了痰湿型PCOS患者的中医证候表现,性激素紊乱的状态得到一定程度的纠正,代谢紊乱如BMI、胰岛素抵抗及高脂血症得到了明显的改善,各时间节点GLP-1的分泌水平明显升高。基于以上实验结果及大量的研究已证实的肠道菌群与GLP-1分泌的密切相关性,推测补肾化痰方可能是通过改变肠道菌群结构,影响GLP-1的分泌,进而影响到人体的糖脂代谢。