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目的 探讨p27kip1蛋白表达与食管癌临床病理的关系。构建携带人p27kip1cDNA的重组腺病毒，研究p27kip1基因转移对食管癌的体内、外抑制作用，并探讨其抑癌机制。 方法 ①免疫组织化学方法（SP法）检测p27kip1在27例食管癌中的表达情况。②将人p27kip1cDNA片段定向克隆于穿梭质粒pACCMVPLPA的CMV启动子之下，获得pAd-p27kip1，通过脂质体与pJM17共转染293细胞，经同源重组制备出携带人p27kip1cDNA的重组腺病毒——Ad-p27kip1。将Ad-p27kip1、Ad-LacZ转染293细胞进行扩增、CsCl密度梯度离心、纯化，以获得大量Ad-p27kip1和Ad-LacZ。③将Ad-p27kip1转染人食管癌细胞Eca9706，MTT法、3H-TdR和3H-Leucine掺入试验检测对细胞增殖的影响，流式细胞仪（FCM）检测对细胞周期及凋亡的影响，DNA片段分析进一步检测凋亡的变化，TRAP PCR-ELISA法定量检测端粒酶的活性变化，免疫细胞化学染色检测p27kip1、Survivin表达的变化，免疫印迹法进一步检测Survivin表达。④用人食管癌细胞Eca109接种于裸鼠皮下，原代生长后在鼠间传代，再用组织块移植法构建食管癌裸鼠模型，应用直接注射法，将Ad-p27kip1和Ad-LacZ分别导入裸鼠食管癌瘤体中，与对照组比较，绘制肿瘤生长曲线，并计算肿瘤生长抑制率。用免疫组织化学法检测各组瘤体p27kip1、Survivin的表达，免疫印迹法进一步检测Survivin表达。 结果 ①p27在食管癌阳性表达率为40.7％，癌旁正常组织均有表达。②成功构建并制备出大量纯度高的Ad-p27kip1、Ad-LacZ。③Ad-p27kip1转染人食管癌细胞Eca9706后，细胞存活率下降，3H-TdR和3H-Leucine掺入量明显降低（P＜0.001），FCM显示G0／G1期比例逐渐增加，S期、G2／M期比例降低，G0／G1峰之前出现一个明显的亚二倍体峰即凋亡峰，DNA片段分析显现明显的梯状条带，端粒酶活性降低（P＜0.01），食管癌细胞中p27kip1呈低表达，Survivin高表达，p27kip1基因转染后p27kip1表达明显增强，Survivin表达降低。④成功构建出人食管癌裸鼠模型，p27kip1基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制，与对照组比较，有显著性差异（P＜0.001），肿瘤生长抑制率达64.1％。HE染色病理检测示裸鼠肿瘤为食管低分化鳞状细胞癌，对照组瘤体p27kip1低表达、survivin高表达，而p27kipl基因治疗组肿瘤p27kipl明显高表达，Survivin低表达。 结论P27kiPI蛋白在食管癌中表达降低，在食管癌发生、发展中扮演重要角色。P27kiPI基因转移对食管癌具有较显著的体内、外抑制作用，其机制是抑制Survivin表达，使细胞产生G，期阻滞，抑制端粒酶活性，并诱导凋亡，表明该基因疗法是食管癌治疗的新途径。