【摘 要】
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纤维素是由p-D-葡萄糖通过β-1,4-糖苷键连接成直链多糖,是含量最丰富的生物资源。随着社会经济的不断发展,生物资源的利用受到人们越来越多的关注。研究人员发现99 %的环境
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纤维素是由p-D-葡萄糖通过β-1,4-糖苷键连接成直链多糖,是含量最丰富的生物资源。随着社会经济的不断发展,生物资源的利用受到人们越来越多的关注。研究人员发现99 %的环境微生物不能通过纯培养得到。这些未培养微生物成为巨大的、急需开发的基因资源和产业。研究人员为了开发为培养微生物资源,发展了许多新的技术,其中最重要的当数宏基因组文库。在本研究中我们采用间接提取法从牛瘤胃内容物中提取环境总DNA,针对不同的需要使用不同方法纯化提取的DNA,其中为了构建粘粒文库,我们使用改良的化学方法使提取的DNA长度达到2000 Kb且杂质很少能够满足分子生物学实验的要求,可以进行噬菌体转染,为了弥补大片段DNA产量低的缺陷,本课题还采用了传统的DNA抽提方法,提取到大量200 Kb左右的DNA,进行质粒文库的构建。本课题通过平板影印技术在物种鉴别培养基上分别筛选纤维素内切酶,纤维素外切酶,β-葡萄糖苷酶,木聚糖酶和甘露聚糖酶。经过为期一年半的筛选,从文库中筛选到了一个含有β-葡萄糖苷酶的阳性克隆,命名为Cello-1。经过生物信息学分析和原核表达等手段对Cello-1进行的酶学性质的研究仍然在进行中。
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