大豆磷脂对大黄鱼(Larmichthys crocea)稚鱼和幼鱼生长和磷脂代谢的影响

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以大黄鱼(Larmichthys crocea)为研究对象,通过摄食生长实验,比较研究大豆磷脂对大黄鱼稚鱼和幼鱼生长的影响,并在此基础上探讨大黄鱼磷脂代谢的机理。本文研究内容和主要研究结果如下:1饲料磷脂对大黄鱼稚鱼和幼鱼生长和体组成的影响分别以初始体重为(3.86±0.24)mg和(7.36±0.33)g的大黄鱼仔稚鱼和幼鱼为对象,进行30d和60d的摄食生长实验,研究饲料磷脂对大黄鱼的生长和体成分的影响,进而确定大黄鱼幼鱼饲料磷脂的最适需求量。仔稚鱼饲料中添加0%、5%和12%的大豆磷脂配制等氮等脂的人工微颗粒饲料,分别投喂15日龄大黄鱼仔稚鱼,并以投喂生物饵料组为对照。幼鱼饲料中添加0%、2%、4%、6%和8%的大豆磷脂配制等氮等脂的实验饲料。实验结果表明,随着饲料磷脂含量的升高,大黄鱼仔稚鱼的存活率、特定生长率和终末体长呈现升高的趋势。饲料不添加磷脂组的存活率、特定生长率和终末体长显著低于对照组和磷脂添加组(P<0.05),饲料磷脂添加组与对照组之间差异不显著(P>0.05)。然而,饲料中添加磷脂并未显著影响幼鱼的存活率和特定生长率(P>0.05)。随饲料磷脂含量的升高,稚鱼鱼体粗脂肪呈现升高的趋势。饲料不添加磷脂组的鱼体粗脂肪显著低于对照组和磷脂添加组(P<0.05),饲料磷脂添加组与对照组之间差异不显著(P>0.05)。随着饲料磷脂含量的升高,幼鱼鱼体粗脂肪含量呈现先下降后升高的趋势,当饲料磷脂含量为5.86%时最低,显著低于其它处理组(P<0.05)。随着饲料磷脂含量的升高,幼鱼肝脏脂肪含量呈现先升高后下降的趋势。当饲料磷脂含量为3.05%时最高,显著高于其它处理组(P<0.05);饲料不添加磷脂组显著高于7.4%和9.63%添加量组(P<0.05)。综上结果,饲料磷脂对生长的促进作用主要在稚鱼阶段;幼鱼阶段饲料磷脂不会显著影响大黄鱼的生长,但是适宜的磷脂添加量可能有利于脂肪的吸收转运。2大黄鱼磷脂代谢关键基因的克隆及其表达量随稚鱼生长发育的变化利用同源克隆技术和RACE技术从大黄鱼肝脏中成功扩增出5’胞苷三磷酸磷脂酰胆碱胞苷转移酶(CCT)和胞质型磷脂酶A2(cPLA2)的全长。序列分析发现,CCT全长2419bp(Genebank登录号:KF006239.1),包括273bp的5’端非编码区,1107bp的开放阅读框,1010bp的3’端非编码区,共编码369个氨基酸。cPLA2全长共计2550bp(Genebank登录号:KF006240.1),其中5’端非编码区176bp,开放阅读框2169bp,3’端非编码区205bp,共编码723个氨基酸。系统进化树分析表明,大黄鱼的CCT和cPLA2基因与其他鱼类的亲缘关系较近,与其他物种的亲缘关系较远。应用Real-time PCR对不同日龄的大黄鱼稚鱼CCT和cPLA2mRNA的表达量进行检测。定量结果表明,孵化后,大黄鱼稚鱼CCT和cPLA2的表达量随日龄的变化先显著升高后显著下降并趋于平稳,且都在15日龄时达到最大值。CCT和cPLA2表达量的变化与大黄鱼稚鱼消化系统的发育同步。3饲料磷脂对大黄鱼稚鱼和幼鱼磷脂酰胆碱合成代谢的影响研究结果表明,在稚鱼阶段,饲料磷脂没有显著影响稚鱼鱼体磷脂酰胆碱胞苷酰基转移酶(CCT)、1,2-二脂酰甘油:胆碱磷酸酰基转移酶(CPT)、二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT)、磷脂酰乙醇胺-N-甲基转移酶(PEMT)和胞质型磷脂酶A2(cPLA2)mRNA的表达(P>0.05)。随着饲料磷脂含量的升高,分泌型磷脂酶A2(sPLA2)mRNA的表达量呈现下降趋势。当饲料中不添加磷脂时,分泌型磷脂酶A2(sPLA2) mRNA的表达量最高,显著高于对照组和磷脂添加组(P<0.05)。对照组LPCAT mRNA的表达量最高,显著高于饲料处理组(P<0.05),各饲料处理组织间差异不显著(P>0.05)。随着磷脂含量的升高,微粒体甘油三酯转移蛋白(MTP)mRNA的表达量呈现下降的趋势。当饲料中不添加磷脂时最高,显著高于对照组和磷脂添加组(P<0.05)。而各组之间载脂蛋白B100(apoB100)mRNA的表达量没有显著性差异(P>0.05)。幼鱼阶段,饲料磷脂没有显著影响幼鱼肝脏CCT、CPT、DGAT、PEMT、sPLA2、cPLA2和LPCAT mRNA的表达量(P>0.05)。综上所述,磷脂酰胆碱(PC)合成代谢关键酶的调控可能发生在蛋白水平或磷酸化水平,而不是转录水平。重塑后的PC可能影响脂蛋白的代谢。
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