凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)血蓝蛋白免疫作用的初步研究

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本文研究了注射磷脂酰丝氨酸(PS)和病原菌对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响。主要内容包括:①注射磷脂酰丝氨酸对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响;②注射哈维氏弧菌和金黄色葡萄球菌对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响。主要研究结果如下:1注射PS对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响结果表明:注射0.25,0.5,1μg PS对凡纳滨对虾血蓝蛋白含量、p75和p77亚基、mRNA表达以及血细胞总数(THC)、血细胞酚氧化酶原(pro-PO)、血浆酚氧化酶(PO)、血蓝蛋白酚氧化酶(Hd-PO)以及抗菌和溶菌活力影响显著(P<0.05),而对照组无显著变化。血蓝蛋白含量在6h内略有下降,6~36h内呈峰值变化,24h时达到最大值;血蓝蛋白亚基p75、p77和基因表达在0~36h内呈峰值变化,12h时达到最大值。THC和pro-PO活力在0~12h内处于下降趋势,并在12h处达到最低值;PO活力在48h内呈峰值变化,于12h处达到最高值;Hd-PO活性在36h内呈峰值变化,12h时达到最大值。抗菌和溶菌活力分别在36h和48h之内呈峰值变化,并分别于12h和24h处达到最高值。由此说明,PS能够激活凡纳滨对虾血蓝蛋白的酚氧化酶活性,引起一系列免疫指标的变化,表现出明显的时间剂量效应,在短时间内引起血蓝蛋白含量下降,随后机体启动血蓝蛋白的合成机制,证实PS是凡纳滨对虾血蓝蛋白发挥酚氧化酶活性的激活因子,同时PS还是对虾体内的一种免疫刺激物质,为对虾血蓝蛋白免疫活性的研究奠定了理论基础。2注射哈维氏弧菌和金黄色葡萄球菌对凡纳滨对虾血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性的影响结果表明,哈维氏弧菌(Vibro harveyi)(×10~5cells/mL,×10~6cells/mL)和高浓度组(×10~6cells/mL)金黄色葡萄球菌(Staphyloccocus aureus)对血蓝蛋白含量、p75和p77亚基、mRNA表达以及血浆PO、Hd-PO以及抗菌和溶菌活力影响显著(P<0.05),而对照组则无显著变化。在48h之内:血蓝蛋白含量呈波动趋势,12h降为最低值,24h达最大;血蓝蛋白p75、p77亚基和mRNA表达呈峰值变化,其中p75、p77亚基表达于24h达峰值,mRNA表达于12h处达峰值。血浆PO和Hd-PO活力在24h处达最高值;抗菌和溶菌活力分别在12h和24h达最大值。低浓度组金黄色葡萄球菌(×10~5cells/mL)对血蓝蛋白合成、酚氧化酶活性影响不显著,对血浆抗菌和溶菌活力影响显著(P<0.05)。其中,48h之内抗菌活力在12h达到最大值,而溶菌活力在24h处达到最大值。所有处理组中血细胞抗菌肽penaedin1/2表达不显著。结果说明,对虾在病原菌哈维氏弧菌入侵下启动了血蓝蛋白的合成,诱导血蓝蛋白基因的表达,新合成的血蓝蛋白主要执行酚氧化酶(Hd-PO)等免疫功能,参与免疫防御,进一步提升血淋巴中pro-PO激活系统的免疫调节作用;注射高浓度的金黄色葡萄球菌同样起到了病原菌哈维氏弧菌的效果。
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