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目的:本文对高速逆流色谱(High-Speed Counter-Current Chromatography, HSCCC)在中药活性成分分离纯化中的应用进行研究,建立麻黄、苍白秤钩风、钩吻和蟾酥中的活性成分分离纯化的高速逆流色谱方法,为从中药材中快速、高效地分离纯化出活性成分提供新的方法借鉴,同时为中药药效成分标准物的快速制备和新药的研究与开发提供技术支撑。方法:采用硅胶柱色谱法和高速逆流色谱法(High-Speed Counter-Current Chromatography, HSCCC)分离纯化麻黄中的黄酮类成分;利用HSCCC分离苍白秤钩风中的蜕皮甾酮类成分;采用pH-区带精制逆流色谱法(pH-zone-refining counter-current chromatography)制备钩吻中的吲哚类生物碱;利用HSCCC结合制备性高效液相色谱(Preparative High Performance Liquid Chromatography, pre-HPLC)的方法分离纯化蟾酥中的蟾蜍二烯羟酸内酯类化合物。利用HPLC测定分离所得到的所有化合物的纯度,并利用质谱(MS)与核磁共振波谱(NMR)等技术对其化学结构进行鉴定。结果:从麻黄中分离得到2个双黄酮和2个黄酮,鉴定为麻黄宁A、麻黄宁D、二氢槲皮素和儿茶素,纯度都大于98%;从苍白秤钩风中分离得到3个蜕皮甾酮类化合物,鉴定为paristerone、ecdysterone和capitasterone,纯度均大于98%;从钩吻中制备分离到6个吲哚类生物碱单体,鉴定为19-oxo-gelsenicine、gelsemine、 koumine、11-methoxygelsemamide、gelsenicine和humantenine,纯度均大于95%;从蟾酥中分离得到8个蟾蜍二烯羟酸内酯类化合物,鉴定为沙蟾毒精、蟾毒它灵、19-氧代华蟾毒精、华蟾毒它灵、蟾毒灵、华蟾毒精、脂蟾毒配基和嚏根草配基-3-辛二酸半酯,纯度均大于96%。结论:高速逆流色谱通过采用各种类型的溶剂系统,能实现从微克、上百毫克到数克量级的分析分离和制备纯化。由于逆流色谱不使用固态载体,从而避免了因不可逆吸附导致的样品损失、失活与变性等,特别适合用于天然产物有效成分的分离。