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目的:在前期委陵菜抗糖尿病有效成分的研究中,发现了抗糖尿病主要化学成分委陵菜黄酮(tiliroside),委陵菜黄酮药代动力学的初步评价发现,该化合物在体内受到羧酸酯酶的作用大量分解,半衰期短,生物利用度低,影响了委陵菜黄酮的药效发挥。进一步的衍生合成及活性筛选发现了活性更强的黄酮衍生物Fla-CN,动物实验结果表明Fla-CN抗糖尿病作用优于二甲双胍。本实验对Fla-CN进行药代动力学性质初步研究,一方面研究口服Fla-CN对大鼠细胞色素P450酶(CYP450)六种亚型 CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4体内代谢活性的影响,另一方面建立测定大鼠血浆中Fla-CN及其代谢产物血药浓度的HPLC-MS/MS方法,测定血药浓度-时间曲线,考察其药代动力学特征,为进一步研究提供实验依据。方法:1.采用“Cocktail”探针药物法,使用6种特异性探针药物:咖啡因、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、美托洛尔、氯唑沙宗和咪达唑仑,通过其药代动力学参数的变化来评价大鼠CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4六种亚型的体内代谢活性。将大鼠分为6组:空白对照组、低剂量Fla-CN组、中剂量Fla-CN组、高剂量Fla-CN组、抑制剂对照组、诱导剂对照组。连续给药14 d后,腹腔注射“Cocktail”探针药物溶液,并于各时间点取血,采用HPLC-UV法测定血浆中各探针药物浓度,通过对对照组和各实验组各探针药物药代动力学参数的比较,评价Fla-CN对大鼠CYP450六种亚型体内代谢活性的影响。2.取健康雄性SD大鼠,灌胃给予Fla-CN 140 mg/kg,分别于各时间点取血制备分析样品,以委陵菜黄酮(tiliroside)为内标,HPLC-MS/MS分析,色谱条件为乙腈-水(65:35),流速0.4 mL.min-l,Agilent XDB-C18色谱柱,通过电喷雾三重四级杆串联质谱,以多反应监测模式(MRM)进行检测,对其质谱图及提取离子流进行分析,推测其可能代谢产物,再合成相应对照品进行进一步的确认。最后通过检测离子对进行定量分析,绘制出血药浓度-时间曲线,并经DAS2.0药代动力学软件拟合体内药代动力学参数。结果:1.与空白对照组相比,低剂量Fla-CN组咖啡因的AUC、MRT降低,CL升高(P<0.05);高剂量Fla-CN组咖啡因的AUC、MRT降低(P<0.05)。高剂量Fla-CN组美托洛尔的AUC升高,CL降低(P<0.05),t1/2没有明显变化。中、高剂量Fla-CN组咪达唑仑的AUC升高,CL明显降低(P<0.05),t1/2没有明显变化。各组氯唑沙宗和甲苯磺丁脲的主要药代动力学参数均没有显著差异(P>0.05)。2.通过LC-MS/MS手段对给药后大鼠血浆进行分析,鉴定出给药后大鼠血浆中可能存在的两种Fla-CN代谢产物M1和M2。同时我们建立了LC-MS/MS方法对Fla-CN和两种代谢产物M1及M2进行定量分析,血浆中Fla-CN、M1和M2在0.5-1000、0.1-1000和0.2-1000 ng·mL-1范围内均呈现良好的线性关系,方法的日内和日间精密度(RSD)均小于4.9%,准确度(RE)在±6.2%之内。给药后Fla-CN、M1和M2的药时曲线下面积AUCo-∞分别为173.982、24.271和0.557 μg.L—1.h,Tmax分别为 1.500、10.375和0.500 h,Cmax分别为22.117、0.722和0.077 μg.L—1,t1/2z分别为8.516、6.055和9.146 h。结论:本实验进行了 Fla-CN对CYP450活性影响的初步评价,结果提示Fla-CN对CYP3A4和CYP2D6的体内代谢活性具有一定的抑制作用,诱导CYP1A2的体内代谢活性,CYP2E1和CYP2C9的体内代谢活性没有影响。大鼠灌胃给药Fla-CN 140 mg/kg后的药代动力学参数结果表明,灌胃给药后Fla-CN在体内主要以Fla-CN形式进行分布,代谢产物分布较窄,Fla-CN及其代谢产物M1和M2达峰浓度均较低,说明灌胃给药Fla-CN的生物利用度较低,其原因可能是在水中的溶解度低、吸收不完全或是胃肠道代谢酶的影响等,需要进一步的深入研究。