穿山龙提取物薯蓣皂苷对1型糖尿病小鼠胰腺中Bcl-2/Bax蛋白表达的影响

来源 :辽宁中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zifeng_ok
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目的:运用网络药理学的研究方法通过对于中药穿山龙中的活性成分、作用靶点、信号通路进行筛选预测,探究中药穿山龙活性成分对于1型糖尿病的潜在作用机制,为今后的动物学实验奠定理论基础;通过网络药理学预测结果,选定中药穿山龙中的主要成分薯蓣皂苷进行动物实验,深入研究中药穿山龙提取物薯蓣皂苷对于1型糖尿病小鼠胰腺中细胞凋亡相关的Bcl-2、Bax蛋白表达影响,以进一步证实中药穿山龙提取物薯蓣皂苷对于1型糖尿病小鼠胰腺具有保护作用,为中医药防治1型糖尿病提供新的治疗思路。材料与方法:1.网络药理学:通过数据库检索、文献收集参考,整理出中药穿山龙中含有的主要化学成分信息,依据Lipinski类药性的5倍率原则,结合国内外文献资料,筛选出中药穿山龙的有效活性成分。利用Swiss数据库预测出中药穿山龙中潜在活性成分的作用靶点。使用OMIM、Genecards数据库获得疾病作用靶点。使用Venny2.1在线软件作图工具平台绘制韦恩图,获得药物-疾病共同靶点;使用Cytoscape软件,构建“药物-成分-靶点-疾病”网络图;使用String10.5数据库和Cytoscape软件绘制PPI蛋白相互作用网络图,基于PPI蛋白相互作用网络图进行拓扑分析、聚类分析;基于R软件使用Bioconductor生物信息软件对获得的靶点蛋白进行GO生物过程、细胞组分富集分析、KEGG信号通路富集分析。2.动物实验:选取SPF级成年雄性C57BL/6小鼠89只,进行12h的循环光照,自由获取食物和水,7天内对小鼠进行正常的喂养适应,随机地从中选取出12只小鼠作为正常对照组,全部小鼠采用普通饲料进行正常喂养,对剩余的小鼠进行12小时的彻底禁食后,连续5天对剩余小鼠进行腹腔注射,注射物为1%的链脲佐菌素50mg/kg(PH值为4.2),采血针取小鼠尾静脉血,进行血糖测定,数值>16.7mmol/L者判定为诱发1型糖尿病模型成功。成模后将剩余小鼠进行随机分组,分别标注为1型糖尿病模型组、低剂量薯蓣皂苷组、高剂量薯蓣皂苷组、强的松组。观察治疗前0w、治疗后4w、8w、12w各组小鼠的一般状况(包括毛色、精神状态、行为学特征等)、血糖,观察造模前0w’、治疗后4w、8w、12w。在治疗12w末处死各组小鼠,取其胰腺组织备用。通过蛋白印迹法(Western Blot,WB)对各组小鼠胰腺组织中Bcl-2、Bax蛋白表达水平进行检测。结果:1.穿山龙中共16个活性成分可通过参与细胞凋亡、免疫、氧化应激等过程来发挥治疗T1DM的作用。2.薯蓣皂苷可上调T1DM小鼠胰腺中抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达,下调T1DM小鼠胰腺中促凋亡蛋白Bax的蛋白表达,改善T1DM小鼠胰腺中细胞凋亡情况,从而对T1DM小鼠胰岛β细胞有保护的作用。结论:1.Bcl-2/Bax信号通路是T1DM小鼠胰岛β细胞凋亡的通路之一。2.薯蓣皂苷可能通过上调Bcl-2蛋白水平,下调Bax蛋白水平,来改善T1DM小鼠的胰腺细胞凋亡情况,起到保护T1DM小鼠胰岛β细胞的作用。
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