HCC是一种血供丰富的原发性肝脏恶性肿瘤,抑制肿瘤血管新生已经成为肝癌临床治疗的主要内容之一。HNF4a是肝脏富含的转录因子,在肝细胞的分化,对胚胎期肝脏上皮的形成和肝脏形态的发育方面不可缺少。近年来研究证实HNF4a能够阻遏HCC的发生和发展,HNF4a在HCC组织中表达下调,并且过表达的HNF4a能够明显抑制HCC生长。然而HNF4a对HCC血管新生的影响及其发生机制尚无较详细阐述。目的:探讨HNF4a对HCC血管新生的影响及其发生机制。方法:1、通过过表达HNF4a的慢病毒转染人肝癌细胞株hepG2和SMMC-7721,构建HNF4a-hepG2和HNF4a-SMMC-7721稳转株,并且将该组细胞作为实验组。同时以慢病毒空载体转染的hepG2和SMMC-7721细胞作为阴性对照组,hepG2和SMMC-7721细胞作为空白对照组。通过qPCR,Western blot和荧光显微镜观察转染效率。2、通过 qPCR 检测 hepG2 和 SMMC-7721 三组细胞的 VEGF、Ang-1、Ang-2、HGF、TGF-β和PDGF的mRNA的表达情况。收集hepG2和SMMC-7721细胞三组条件培养基,通过Elisa检测三组条件培养基中VEGF、Ang-1和Ang-2蛋白表达情况。3、将三组条件培养基与HUVEC共培养,观察HNF4a对HUVEC小管形成能力的影响。4、将HNF4a-SMMC-7721细胞株注射至裸鼠皮下,并将该组作为实验组,同时以皮下注射SMMC-7721细胞组作为对照组。于第三周处死裸鼠,测量肿瘤质量以及体积,并通过免疫组化检测CD31和CD34的表达情况。5、通过Western blot检测SMMC-7721三组细胞中P-P65的表达情况,利用NF-KB激动剂TNF-a刺激SMMC-7721三组细胞,并通过小管形成实验观察三组细胞条件培养基对HUVEC成管能力的影响。结果:1、成功构建 HNF4a-hepG2 和 HNF4a-SMMC-7721 稳转株。2、HepG2 细胞实验组 VEGF、Ang-1、Ang-2、HGF、TGF-β 和 PDGF 的 mRNA表达量明显少于阴性对照组和空白对照组。SMMC-7721细胞实验组VEGF、Ang-1、HGF、TGF-β和PDGF的mRNA表达量明显少于阴性对照组和空白对照组,但是三组间Ang-2 mRNA表达量没有明显差别。Elisa结果提示,hepG2和SMMC-7721细胞实验组VEGF表达量明显低于阴性对照组和空白对照组,但Ang-1表达量明显高于阴性对照组和空白对照组。HepG2细胞实验组Ang-2表达量明显低于阴性对照组和空白对照组,而SMMC-7721细胞三组间Ang-2蛋白表达量没有明显差别。3、实验组HUVEC小管形成数量明显少于阴性对照组和空白对照组。4、实验组裸鼠肿瘤的体积和质量明显小于对照组。同时实验组裸鼠CD31和CD34的表达量也明显低于对照组。5、SMMC-7721细胞实验组P-P65的表达量明显低于阴性对照组和空白对照组,TNF-a激活NF-KB通路后,实验组和阴性对照组和空白对照组HUVEC小管数量均明显增加,但是当TNF-a浓度为60ng/ml时三组间无明显差异。结论:HNF4a具有抑制HCC肿瘤新生血管生成的作用,NF-KB信号通路可能参与了 HNF4a对HCC血管新生的调节。