本实验以羽扇豆粉为原料,采用碱溶酸沉法得到羽扇豆蛋白,通过酶解、超滤分离得到不同的羽扇豆多肽,然后采用体外化学方法和体外细胞实验综合分析评价其抗氧化活性,筛选出抗氧化活性最强的羽扇豆多肽组分。从而为羽扇豆活性肽的开发和应用提供理论依据。首先,应用碱性蛋白酶(Alcalase)、胃蛋白酶(Pepsin)和胰蛋白酶(Trypsin)酶解羽扇豆蛋白,得到羽扇豆蛋白酶解液,并采用体外化学反应的方法评价羽扇豆蛋白酶解液的抗氧化活性和ACE抑制活性。研究发现,羽扇豆蛋白经过水解后,其生物活性逐渐增大了,其中Alcalase水解物具有最高的自由基清除能力和总抗氧化能力,Trypsin水解产物在水解30min时表现出最强的ACE抑制活性;然后,采用超滤分离技术将羽扇豆蛋白酶解液分离成3种不同分子量的组分,分别为LPH1(MW>10KDa)、LPH2(MW3-10KDa)和LPH3(MW<3KDa),针对三种组分进行抗氧化活性和ACE抑制活性分析显示,LPH3具有最高的抗氧化能力和ACE抑制活性;而三种组分氨基酸成分分析结果说明,LPH3的高抗氧化活性和ACE抑制活性与其含有丰富的疏水性氨基酸和芳香族氨基酸有关。其次,采用体外细胞实验分析羽扇豆多肽组分对氧化损伤细胞的保护作用。针对三种羽扇豆多肽组分进行细胞毒性试验结果显示,LPH1、LPH2和LPH3三种组分分别在浓度为4、6和8mg/mL时对细胞无毒性及增殖作用;以细胞活力为指标,采用H202构建氧化损伤模型,确定最佳造模条件为在H202浓度为300 μmol/L诱导时间为4h时,细胞活力约为47.68±3.75%;利用HepG2细胞氧化损伤模型,评价三种羽扇豆多肽组分的抗氧化损伤作用,三种组分均能不同程度地提高损伤细胞的活力,其中LPH3的细胞保护作用最好。最后,综合体外化学反应和细胞实验结果,筛选出LPH3进行抗氧化损伤机制研究。LPH3预保护细胞后,综合分析细胞内各项指标变化,结果显示,相比于H202损伤组细胞,LPH3保护组能抑制活性氧(ROS)的累积,减少丙二醛(MDA)的生成,同时提高损伤细胞内超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性;利qPCR法检测细胞内氧化应激和凋亡相关基因的mRNA转录水平,结果显示,与损伤组细胞相比,LPH3预保护细胞后,可以显著上调SOD1、GPX1、GCLM、SLC7A11和SRXN1氧化应激基因的表达量,此外还可以降低CASP3和p53基因表达水平,上调Bcl-2的表达水平。充分说明LPH3可以通过抑制氧化应激和阻断线粒体凋亡通路,起到抗氧化损伤保护细胞的作用。