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[背景与目的]:动脉粥样硬化(atherosclerosis,As)是一种慢性炎症性疾病,其中血管炎症被认为是As发生发展的关键环节。当血管受损时,巨噬细胞作为免疫系统的主要效应细胞,被募集至受损部位并大量蓄积脂质形成泡沫细胞;与此同时,泡沫细胞促进大量的巨噬细胞、T淋巴细胞等炎症细胞聚集于损伤部位。这些免疫细胞可释放各种炎症介质进一步促进泡沫细胞形成,形成恶性循环,加剧As发生发展。巨噬细胞的相关调控机制是As疾病防治研究的重要环节。近年来,RNA修饰作为新兴调控方式,其对疾病的影响已受到学者的广泛关注。其中N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)作为mRNA上最为丰富的修饰,对于基因转录、翻译、表达调控等生命进程发挥着重要调控作用。m6A修饰是指腺嘌呤第6位N原子上的甲基化修饰,其中METTL3(methyltransferase like 3,METTL3)亚基是m6A甲基转移酶复合体中的核心组分,在人体内广泛分布。近期研究发现,METTL3过表达可以抑制脂肪水平并降低胞内甘油三酯,另在心肌重构等功能中也发现METTL3具有重要调控作用。METTL3和m6A修饰在心血管领域中的作用已逐渐揭示。为了进一步证实METTL3与As的联系,本课题组前期实验结果表明METTL3在As斑块中广泛表达;并且人髓系白血病单核细胞(human myeloid leukemia mononuclear cells,THP-1)经氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)处理诱导泡沫化后,METTL3的表达明显增高。以上提示METTL3介导的m6A修饰可能是As疾病发生发展新的调控途径,但其具体作用和机制尚待阐明。因此,本文以METTL3为切入点,探究METTL3介导的m6A修饰对巨噬细胞源性泡沫细胞的影响及潜在机制。[方法]:取人As斑块组织做切片,运用免疫组化染色(immunohistochemistry,IHC)检测斑块组织内METTL3的表达情况;建立小鼠高脂血症模型,建模成功后取小鼠心脏做主动脉瓣冰冻切片,利用油红O染色检测小鼠动脉粥样硬化斑块的建模成果,同时运用IHC检测斑块内METTL3的表达;培养THP-1单核细胞,利用佛波酯(phorbol myristate acetate,PMA)诱导其形成巨噬细胞,加入ox-LDL培养并使巨噬细胞荷脂,构建泡沫细胞模型,通过蛋白质印迹法(Western Blot,WB)、EpiQuik m6A RNA甲基化定量试剂盒检测泡沫细胞内METTL3及整体m6A水平,并完成m6A高通量测序,利用IGV、KEGG等数据分析筛选泡沫细胞中m6A明显变化路径及靶基因。[结果]:METTL3在人As斑块和小鼠主动脉As斑块中广泛表达;THP-1经处理诱导为泡沫细胞后,METTL3及整体m6A修饰表达升高;m6A测序结果显示,细胞凋亡通路m6A修饰水平发生明显变化;在泡沫细胞内干扰METTL3表达后,细胞凋亡水平上升,细胞内BAX蛋白水平及mRNA水平上升,并且促凋亡蛋白BAX mRNA上检测到明显的m6A峰。[结论]:1.METTL3介导的m6A修饰参与As的调控;2.在As早期,巨噬细胞泡沫化后,METTL3可能通过介导BAX mRNA上m6A修饰,抑制细胞凋亡,促进As斑块发生发展。