β-葡聚糖生物活性功效卓越,现已广泛应用在食品、医药、护肤化妆用品等领域。本课题分析了双孢蘑菇β-葡聚糖的结构组成,探究了该β-葡聚糖对HaCat细胞的毒性及对细胞结合受体表达的影响,探讨了β-葡聚糖对HaCat细胞抗紫外线方面的机制和对细胞自噬的作用,明确了双孢蘑菇β-葡聚糖在护肤方面的功效,为β-葡聚糖更好地用于护肤产品提供科学的理论数据。试验采用碱法提取双孢蘑菇β-葡聚糖,运用红外光谱、高效液相色谱、气相色谱等仪器,分析确定双孢蘑菇提取物为β-葡聚糖,为色谱单峰物质,相对分子量为575610.4Da,纯度较高,主要由单一葡萄糖通过β-1,4糖苷键连接而成,其中β-1,4糖苷键占比为86.7%,β-1,6糖苷键占比4.92%,β-1,2糖苷键占比8.38%。采用RT-PCR检测HaCat细胞具有β-葡聚糖受体基因表达,分别是CR3、TLR2、TLR4、TLR6和dectin-1受体基因,且高浓度的β-葡聚糖会使HaCat细胞的相关受体基因表达量增多。利用流式细胞仪检测发现:FITC-β-葡聚糖(FICT标记β-葡聚糖)作用2 h时,99.5%的HaCat细胞中可以检测到FITC-β-葡聚糖,同时会有70.5%的FITC-β-葡聚糖由细胞质转移到细胞核。结果说明双孢蘑菇β-葡聚糖能通过HaCat细胞上的β-葡聚糖受体进入细胞。紫外线是引发皮肤疾病的导火线,紫外辐射会损伤细胞,我们在紫外辐射HaCat细胞模型上研究β-葡聚糖对细胞存活率、细胞形态及产生内皮素的影响。实验结果显示:β-葡聚糖可抑制HaCat细胞产生内皮素-1,该结果有利于阻滞紫外线诱导B16产生的黑色素向HaCat细胞转移。同时发现β-葡聚糖能显著预防UV辐射对B16和HaCat细胞的损伤,同时能够修复低强度UV辐射对细胞的损伤。研究β-葡聚糖对HaCat细胞自噬的影响:通过Western blot、溶酶体探针标记、免疫荧光等手段检测β-葡聚糖对HaCat细胞自噬水平的影响,发现β-葡聚糖能够促进正常HaCat细胞发生自噬,但是会抑制营养缺乏的HaCat细胞的自噬作用。综上所述,双孢蘑菇β-葡聚糖能通过HaCat细胞上的β-葡聚糖受体进入细胞,有效预防紫外辐射对细胞的损伤,减少内皮素-1的产生,阻滞黑色素转运,并具有一定的细胞自噬调控作用,为双孢蘑菇β-葡聚糖作为防晒美白护肤品原料提供一定的理论基础。