结核病是严重影响人类和动物健康的慢性消耗性传染病,结核分枝杆菌和牛分枝杆菌是引起结核病的主要病原菌。艾滋病的广泛流行、国家和个人对卫生保护和知识上的匮乏,使结核病成为世界卫生组织最重要的问题之一。随着耐药结核杆菌的出现,结核杆菌对绝大多数治疗结核病的一线药物产生了不同程度的耐药性,结核病在全球范围内有回升趋势。在1990-2000期间,有41.5%的发展中国家和25%的发达国家结核病疫情明显上升1,2,3。PDZ结构域是介导蛋白质/蛋白质之间相互作用的常见结构域之一,参与细胞信号传导、细胞极性、细胞迁移与入侵及免疫细胞识别等重要的是生物学过程。因此,研究含有PDZ结构域的蛋白有助于更好地了解结核杆菌的在体内的耐药和扩散机制,为新的疫苗和药物研发提供靶标。本课题研究的MT3286蛋白来自结核分枝杆菌CDC1551菌株,与H37Rv、BCG等菌株在基因水平上有100%的同源性。目前关于该蛋白的结构和功能均没有报道,本文根据基因和载体的特点,首先构建pET28a-mt3286重组载体,然后在大肠杆菌BL21(DE3)中大量表达融合蛋白。经过不断优化表达和纯化条件,获得了高纯度的目的蛋白,蛋白大小与预测大小基本吻合。采用Ni-NTA亲和层析和Superdex200凝胶层析等方法纯化目的蛋白,然后测定蛋白对胶原蛋白、透明质酸、硫酸软骨素、BSA及DNA、淀粉、麦芽糖、山梨醇等的作用。结果显示,MT3286与透明质酸、硫酸软骨素和胶原蛋白在39℃作用超过3h后,会有絮状沉淀生成。SDS-PAGE检测发现,沉淀的成分为MT3286和MT3286与胶原蛋白的复合物。本试验成功表达了结核杆菌的一个蛋白,并且发现该蛋白与结核杆菌粘附素(结合杆菌的一种特殊成分,它参与结核杆菌与宿主细胞和细胞外基质的黏附作用)有相似的功能,为进一步的结构和生物学功能的研究提供了依据。