【摘 要】
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近几十年来,由抗生素引起的多重耐药性细菌感染严重威胁着人们的生命健康安全。由于过度依赖抗生素来治疗感染,越来越多的多重耐药性细菌被发现,特别是“ESKAPE”等革兰氏阳性超级耐药菌的出现引起了人们的恐慌,因此需要寻求一种更加安全、有效的新型治疗细菌感染的药物。抗菌肽（antimicrobial peptides,AMPs）是由机体先天性免疫系统所分泌的一种天然宿主防御素,对微生物（细菌、病毒等）甚
【基金项目】
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江苏省农业科技自主创新基金项目（CX（18）2011）；
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近几十年来,由抗生素引起的多重耐药性细菌感染严重威胁着人们的生命健康安全。由于过度依赖抗生素来治疗感染,越来越多的多重耐药性细菌被发现,特别是“ESKAPE”等革兰氏阳性超级耐药菌的出现引起了人们的恐慌,因此需要寻求一种更加安全、有效的新型治疗细菌感染的药物。抗菌肽（antimicrobial peptides,AMPs）是由机体先天性免疫系统所分泌的一种天然宿主防御素,对微生物（细菌、病毒等）甚至肿瘤细胞都有显著的抑制和杀灭作用。抗菌肽具有稳定性好、来源天然、毒性低等优点,无疑是一种很好的抗菌选择。抗菌肽在治疗细菌感染方面有很大的潜力,有望投入到养殖、医药卫生等行业的实际生产中。近年来,我国水产养殖业实行规模化、集约化的养殖方法。水产动物的细菌性疾病由于具有种类多、范围广的特点,经常造成水产动物大规模死亡。目前,我国主要是用抗生素来预防和治疗水产动物的细菌性疾病。但抗生素会在水产动物体内蓄积,影响水产品质量安全,以及产生多重耐药性问题。而且这些养殖废水中的多重耐药性细菌排出后会引发水体污染和公共卫生问题。将抗菌肽应用到水产养殖中,不仅能缓解由抗生素带来的耐药性、水体污染等问题,而且对水产动物的抗病力、免疫性能等有积极影响。本研究探讨了 一种新抗菌肽Bomidin在罗氏沼虾养殖中的应用。Bomidin是由BMAP-27衍生的重组AMPs,是利用基因工程技术,通过大肠杆菌表达系统表达,经分离纯化后获得,相对分子量为24.75 kDa,Bomidin具有分子量小、抗菌活性高、溶血活性低等特点,目前已广泛应用于皮肤和黏膜疾病的治疗中。为了探讨Bomidin作为一种抗菌剂在水产养殖中的应用价值,本研究探究了 Bomidin对水产养殖中常见的几种致病性弧菌（副溶血弧菌、霍乱弧菌、梅氏弧菌、拟态弧菌）的抗菌活性及对副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolytic,VP）的作用机制,并就Bomidin对养殖水体的杀菌性能和对罗氏沼虾的安全浓度进行评价,从而为Bomidin在罗氏沼虾养殖中的应用提供一些指导。1抗菌肽Bomidin的杀菌效果及其作用机制本试验对Bomidin的结构特性和理化性质进行了分析,并探究了重组抗菌肽Bomidin对副溶血弧菌、霍乱弧菌、梅氏弧菌、拟态弧菌的抗菌活性及对副溶血性弧茵（Vibrio parahaemolytic,VP）的作用机制。Bomidin理化性质和结构分析结果表明,Bomidin是一个以α-螺旋结构为主的小肽;抑菌活性和生长曲线测定结果表明,Bomidin对四种弧菌均有良好的杀菌效果。细胞内外膜渗透性试验表明,Bomidin能增大VP细胞膜的通透性。流式细胞术分析显示Bomidin破坏了 VP细胞膜的完整性。透射电镜和扫描电镜结果表明,Bomidin可引起细胞壁和细胞膜的破坏和功能障碍。电泳迁移率和荧光光谱测定结果表明Bomidin以嵌插的方式与VP基因组DNA形成Bomidin-DNA复合物。安全性试验表明,Bomidin对小鼠红细胞具有较低的溶血活性。2抗菌肽Bomidin在罗氏沼虾养殖中的应用为探究抗菌肽Bomidin在罗氏沼虾养殖中的应用,本研究将Bomidin投放到养殖水体中,测定了不同浓度Bomidin对罗氏沼虾幼体死亡数以及水体水质的影响;采用室内试验研究方法,研究了 Bomidin对罗氏沼虾成虾的急性毒性,并计算安全浓度。结果显示,将Bomidin投放到养殖用人工海水中,当浓度为0.004mg/mL时能够杀灭0d养殖用人工海水中50%左右的细菌,对幼体的死亡数无显著影响,若浓度继续增高,会对养殖用人工海水的水质造成一定影响,使幼体的死亡数显著增高（P<0.05）;24 h、48 h Bomidin对罗氏沼虾成虾的半数致死浓度分别为0.29mg/mL、0.19 mg/mL,Bomidin作用于成虾的安全浓度为0.02 mg/mL。
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