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对虾重大流行病害是影响养虾业持续健康发展的关键问题。本文在综述大量养殖对虾病害发生及病害检测技术文献的基础上,选择最具代表性的对虾病毒病(白斑综合症、桃拉综合症、皮下及造血组织坏死症)和弧菌病作为研究对象,研究了白斑综合症病毒的致病性及病理特征,白斑病毒在宿主细胞内的增殖过程,调查了两种病毒在华南地区主要养殖对虾种苗及部分媒介生物中的流行情况,深入研究了对虾集约化养殖条件下病毒病发生特征。采用分子生态学的方法研究了抗生素对于育苗水体细菌区系的影响。开展了对虾弧菌病的生物防治应用研究。主要结果如下:
⑴通过人工感染,研究了WSSV对斑节对虾和墨吉明对虾的致病性及组织病理变化、血液病理特征,探讨了WSSV病毒在宿主体内的增殖过程以及白斑的形成机制;发现口服和肌肉注射WSSV对两种对虾的致病性一致,前者导致80~92%的死亡率,后者导致100%的死亡率,而浸浴感染不能使两种对虾患病;组织病理特征为广泛的上皮组织坏死、核肿胀脱落、结缔组织空泡化等,超微病理则为核膜破损、核仁消失、线粒体肿胀及高尔基体萎缩等,病毒大小240±45×100±17nm,核衣壳大小为186±45×68±12nm。感染宿主后引起的主要血液病理变化包括淋巴细胞的数量显著降低,血清中总磷(TPs)和乳酸脱氢酶(LDH)在36h内显著降低,总蛋白(TPr)16h后显著降低。通过WSSV感染对虾后不同时间的取样观察,发现病毒从感染靶细胞到释放约需48h。
⑵采用PCR和RT-PCR技术,调查了WSSV和TSV在华南沿海三种主要养殖对虾——凡纳滨对虾、斑节对虾和细角滨对虾亲虾及虾苗中的流行状况,发现两种病毒的阳性携带率高达26.2~34.1%;首次在虾池附生的网纹藤壶体内检测并观察到致病性的桃拉综合症病毒。
⑶以典型的热带集约化对虾养殖场为对象,应用本实验室发明的PCR检测试剂盒,通过长期监测WSSV、IHHNV和TSV的发生与流行情况,总结出集约化养殖凡纳滨对虾上述三种病毒病的流行规律。深入研究了病毒病发生与对虾放养密度及池塘主要水质因子之间的关系,提出以水泥护坡、防渗膜铺底、具过滤海水及中央排污系统为结构特征的热带集约化对虾池(年平均气温27~29℃),放养凡纳滨对虾的合理密度为70~100尾/m2;通过对虾死亡数与显著相关指标的回归分析,得出该养殖条件下病毒病发生的预警水质指标分别为:DO—5.0mg/L,NH4-N—0.25mg/L,NO2-N—0.02mg/L,H2S—0.1mg/L,CLV—7.0×103 cfu/ml。通过比较发现,放养经过病毒检疫的虾苗,死亡数及发病率显著降低,成活率及单位面积产量明显提高,说明苗种的病毒检疫对于集约化对虾养殖病毒病预防十分必要。
⑷采用PCR-DGGE相结合的方法,首次研究了育苗过程中使用抗生素类药物(硫酸链霉素)对于苗池水体细菌区系的影响,发现0.5mg/L浓度的硫酸链霉素,作用于水体72h,即可导致明显的菌群变化。对照池水体细菌多样性随着时间的增加逐渐降低,而添加了抗生素的实验池DGGE条带更丰富,可能是抗生素在抑制了某些敏感均的同时,耐药菌群浓度上升所致。
⑸研究了蛭弧菌(Bdellovibrio)对虾类病原菌溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的裂解效应,通过比较发现,蛭弧菌(105 pfu/ml)控制对虾弧菌感染的效果与化学消毒剂(0.3mg/L Cl- or I)相当,控制虾池水体弧菌数量的效果明显优于化学消毒剂。