益气养阴祛瘀方对NOD小鼠TLR-IFN-BAFF信号通路的调控作用

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目的:观察益气养阴祛瘀方对NOD (non-obese diabetic)小鼠TLR-IFN-BAFF信号通路的调控作用,探讨益气养阴祛瘀方对干燥综合征的治疗作用及其机制,为其在临床上应用提供理论依据。方法:将30只8周龄NOD小鼠随机分为3组,即模型组、羟氯喹组、益气养阴祛瘀方组(中药组),每组10只。ICR小鼠10只做为正常对照组。中药组每天按照27.4g/kg灌胃益气养阴祛瘀方;羟氯喹组按照每天75mg/kg灌胃羟氯喹。正常组和模型组正常饲养。实验期间每日记录小鼠平均饮水量,每周测定一次唾液分泌量。灌胃饲养12周后取血并处死小鼠,解剖分离脾脏、胸腺和颌下腺,计算脾脏、胸腺和颌下腺指数,光镜下观察各组小鼠颌下腺病理变化,酶联免疫法检测血清肿瘤坏死因子-α (Tumor necrosis factor-a, TNF-a)、白细胞介素-6(Interleukin-6, IL-6)、脱氢表雄酮(Dehydroepiandrosterone, DHEA)、雌二醇(Estrodio, E2)、免疫球蛋白G (Immunoglobulin G, IgG)水平,RT-PCR法检测外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cell, PBMC)中Toll样受体5(Toll like receptor5, TLR5)、 a-干扰素(Interferon-a, IFN-a)、 B淋巴细胞刺激因子(B-cell activating factor, BAFF) mRNA的表达,Western blot法检测脾脏和颌下腺组织TLR5、IFN-α、 BAFF蛋白的表达。结果:①NOD小鼠发病后每日饮水量增加,唾液分泌量减少,脾脏指数增高,颌下腺指数降低,并伴颌下腺组织淋巴细胞浸润等病理损害。益气养阴祛瘀中药能增加NOD小鼠唾液分泌量,减少其每日饮水量,调节脾脏、胸腺和颌下腺指数,缓解颌下腺病理损害。②NOD小鼠血清TNF-α、IL-6、IgG水平升高,血清DHEA、E2水平降低。益气养阴祛瘀中药能降低NOD小鼠血清TNF-a. IL-6. IgG水平,升高血清DHEA. E2水平,对自身免疫性炎症有抑制作用,并能调节性激素水平。③NOD小鼠PBMC中TLR5、IFN-a. BAFFmRNA表达量增加;脾脏及颌下腺组织TLR5、IFN-a、BAFF蛋白表达水平升高。中药益气养阴祛瘀方能降低干燥综合征样NOD小鼠PBMC中TLR5、IFN-a、BAFFmRNA及脾脏、颌下腺组织TLR5、IFN-a、BAFF蛋白的表达。结论:①益气养阴祛瘀方具有较好的改善NOD小鼠口干多饮症状及颌下腺组织病理损害、促进其分泌功能的作用。②益气养阴祛瘀方具有抑制炎症、调节免疫及性激素水平的作用。③益气养阴祛瘀方能下调TLR5、IFN-α、BAFFmRNA及蛋白的表达,调控TLR-IFN-BAFF信号通路,可能是治疗SS的作用机制之一④益气养阴祛瘀方是治疗NOD小鼠SS样病变较为有效的方法,值得进一步深入研究。
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