腮腺腺细胞体外培养模型建立及细胞外Ca~(2+)对细胞的作用

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唾液腺腺细胞的结构、生长、分化和生理功能的研究已是探讨唾液腺疾病的主要途径。早期,由于缺乏较长期体外培养的唾液腺腺细胞,人们利用体内动物模型和分离的唾液腺腺细胞研究其生长、分化及生理特点,为认识唾液腺提供了重要信息。然而,体内细胞所受的影响因素较多,体外分离的唾液腺腺细胞存活的时间很短,所以,唾液腺许多细胞生物学特性并不十分清楚。 已经知道,细胞Ca2+对细胞的结构与功能起重要作用。细胞内游离Ca2+[Ca2+]i作为第二信使,调节细胞的功能。细胞外Ca2+更是与细胞增殖和分化有关。以往的研究均集中在低于Ca2+生理浓度,而高Ca2+对细胞的作用迄今未见报道。本实验针对高浓度Ca2+与正常腮腺腺细胞结构、生长、分化、生理功能及调节的关系进行系列研究。 实验共分三部分:第一部分,建立正常腮腺腺细胞体外培养模型。以期获得结构、分化及功能类似体内的较纯的体外培养腮腺腺细胞,并可在体外存活较长时间;第二部分,利用高浓度的Ca2+作用培养的腮腺腺细胞,采用先进的现代体视学方法定量测量细胞外Ca2+对培养细胞结构的影响,同时应用免疫组织化学染色技术,观察细胞外Ca2+对细胞连接蛋白、分化有关的蛋白及特异性分泌蛋白合成的影响,探讨细胞外高Ca2+对培养细胞分化和功能的作用。第三部分,采用L-型电压启动的Ca2+通道阻断剂,研究激活的腮腺腺细胞Ca2+代谢途径。 实验结果如下: 1.用添加有利于细胞生长和分化的物质和细胞因子的培养液培养经胶原酶消化、自然沉淀法纯化的腮腺腺细胞,呈单层生长,在体外生存3周,具有分裂能力。免疫组化染色显示,细胞为上皮细胞,包括腺泡细胞、导管上皮和肌上皮细胞。培养7天的细胞,c-fos、c-jun原癌基因
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