【摘 要】
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背景慢性脑低灌注(CCH)是老年认知减退的高危因素,结扎双侧颈总动脉(BCCAO)构建CCH模型广泛用于阿尔兹海默病(AD)及血管性痴呆(VaD)的基础研究。CCH致神经元损伤及相关机制已
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背景慢性脑低灌注(CCH)是老年认知减退的高危因素,结扎双侧颈总动脉(BCCAO)构建CCH模型广泛用于阿尔兹海默病(AD)及血管性痴呆(VaD)的基础研究。CCH致神经元损伤及相关机制已有大量报道,但BCCAO后脑血流变化、脑组织病理改变及自噬机制需进一步探究。目的探索大鼠BCCAO后各时间点脑血流、认知功能、脑灰质及白质形态学变化和细胞内外Aβ聚集情况,并探究其自噬机制。方法1、54只Sprague-Dawley(SD)大鼠,两步法BCCAO构建CCH模型。其中49只随机分7组:假手术组、BCCAO2、4、8、12、16、20周组;2激光散斑血流仪(LSCI)监测结扎前后不同时间点脑血流;3 Morris水迷宫测试各组大鼠空间学习记忆能力;4苏木精-伊红(HE)染色及Klüver–Barrera(KB)染色分别观察灰质及白质形态学改变;5免疫组化法观察细胞内外Aβ聚集情况;6蛋白印迹及免疫组化法检测皮层及海马自噬相关蛋白Beclin-1、LC3B、P62表达水平;透射电镜观察自噬泡形成情况。结果1 BCCAO后8~20周,动物发生明显的认知减退。2 BCCAO后脑血流即刻下降,随后逐渐恢复,第8周开始恢复至结扎前水平。3海马CA1区神经元存活率自BCCAO后8周起显著减少,皮层神经元存活率自4周起显著减少。4 BCCAO后2周~20周可见白质损伤。5细胞内Aβ表达早于细胞外Aβ斑块形成,与皮层相比,海马较早出现Aβ斑块。6 BCCAO后2周~20周的皮层,BCCAO后4周~20周的海马组织,Beclin-1、LC3B表达量增加,反映自噬降解能力的P62表达量增加,提示自噬持续激活而自噬降解能力减弱。7透射电镜观察,BCCAO后各组CA1区及皮层自噬泡数量增多。结论1、两步BCCAO构建的CCH模型,动物认知功能逐渐下降,脑组织病理损伤加重。2、自噬机制参与了海马及皮层神经元损伤,自噬降解能力下降致胞内Aβ异常聚集,与动物认知减退密切相关。
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