树脂原位吸附提高全细胞不对称制备(S)-苯基乙二醇催化效率研究

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(S)-苯基乙二醇((S)-PED)具有特殊的生物活性及光电磁性能,是重要的药物、农用化学品、精细化学品的手性中间体。利用生物催化剂转化制备光学纯苯基乙二醇具有反应条件温和、立体选择性、区域选择性和化学选择性较高等优点。本文以近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis CCTCCM203011)水相中催化不对称制备(S)-PED为研究对象,对反应过程的底物浓度、生物催化剂的稳定性以及产物(S)-PED的提取、精制进行研究,旨在为生物法制备(S)-PED的工业化放大生产奠定一定的基础。具体内容包括:对利用原位吸附技术来提高反应的底物浓度进行了研究。结果表明,在反应体系中添加NKAⅡ大孔吸附树脂缓释底物和容纳产物,可以提高反应的底物浓度。结合树脂对底物的吸附量和菌体反应的最适底物浓度,建立了树脂添加量随底物浓度变化的关系式,通过此公式添加树脂将溶液中底物产物总浓度控制在最适水平,从而实现高底物浓度、快速度反应。最后在40 g/L(R,S)-PED浓度转化体系中加入0.54 g树脂,平衡2 h后,反应108 h,产物(S)-PED的e.e.值和产率达到98.1 %和88.5 %,比优化前反应的(R,S)-PED浓度提高了将近166.7 %。对原位吸附反应体系进行了温度、pH、转速的优化。得出反应的最适条件为30℃,pH 8.0,120 r/min。在此条件下,反应时间缩短,而(R,S)-PED浓度从40 g/L提高到50 g/L时反应108 h其产物e.e.值也能达到97.8%。同时研究了添加木糖和酵母膏对全细胞催化剂稳定性的影响。木糖和酵母膏能增加全细胞稳定性,提高催化批次。30 g/L底物浓度下,第二及第三批次反应添加一定的木糖和酵母膏,第二批次反应48 h后产物e.e.值和产率达到97.8 %和80.6 %,第三批次反应72 h后产物的e.e.值达到近95.0%。通过对添加木糖和酵母膏后反应完成的菌体代谢活力进行了测定,其代谢活力明显高于不添加任何物质的反应体系的菌体。对(S)-PED的提取和精制进行了研究。从6种大孔吸附树脂中筛选出NKAⅡ大孔吸附树脂对产物进行吸附,在本研究的产物浓度下,该树脂对(S)-PED具有较大的吸附量250 mg/(g湿树脂),2 h吸附能达到平衡,吸附等温线符合Freundlich经验式。从11种溶剂中筛选出乙醚作为产物重结晶纯化的溶剂。1 L反应液经1.5 BV/h流速经树脂柱吸附,2 BV乙酸乙酯洗脱,质量浓度3 %的活性炭脱色1 h,约100 mL的乙醚重结晶纯化。以此工艺提取纯化(S)-PED,总收率为74.1 %,(S)-PED质量分数从1.4 %达到98.9 %,光学纯度保持在99.0 %。
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