【摘 要】
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目的：利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质，进一步构建分泌型抗骨肉瘤单链双功能抗体基因，探讨分泌型抗骨肉瘤单链双功能抗体基因表达并分泌针对成骨肉瘤
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目的：利用生物信息学网络资源分析融合蛋白的二级结构及其理化性质，进一步构建分泌型抗骨肉瘤单链双功能抗体基因，探讨分泌型抗骨肉瘤单链双功能抗体基因表达并分泌针对成骨肉瘤细胞的靶向性ScFv-TNF融合蛋白。 方法：融合蛋白的亲和性及抗肿瘤活性分别较衍生因子的功能及活性有所变化，可能由于融合蛋白结构变化导致功能及活性的变化，抗体融合的重组设计实际上只受想象和能够产生正确折叠蛋白产物的表达系统的限制。我们在构建融合蛋白时，选用了通用酶切位点序列，然后运用DNA分析软件(DNAssist)和蛋白质分析软件(ANTHEPROT V5)分析预测融合蛋白的氨基酸序列、二级结构及其理化性质。首先采用PCR方法将人工合成的抗体分泌信号肽序列加在抗骨肉瘤ScFv(single chain variable region fragments antibodv)基因5’端，其3’与人的肿瘤坏死因子TNF基因连接构成分泌型单链双功能抗体ScFv-TNF基因，将该基因克隆至逆转录病毒表达载体PLxSN，构建抗骨肉瘤单链双功能抗体基因逆转录病毒表达载体pL(ScFv-TNF)SN，重组质粒pL(ScFv-TNF)SN在脂质体介导下转染PA317包装细胞，G418筛选，直至出现抗性克隆，扩大培养，用NIH3T3测定病毒滴度，将重组病毒感染人骨肉瘤OC9901细胞，G418筛选出抗性克隆，命名为
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