水臌贴对肝硬化腹水大鼠保肝抗炎的机制研究

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目的:水臌贴是由王灵台教授根据肝硬化腹水的病机,结合中药穴位外敷法的优势综合研制而出,前期基础及临床实验已证实水臌贴具有健脾益肾,温阳利水的功效。本课题参照Alakokko造模法建立肝硬化腹水大鼠模型,观察水臌贴对肝硬化腹水大鼠保肝抗炎的作用并探讨其作用机制,验证水臌贴的多效性,为临床应用提供依据。方法:水臌贴对肝硬化腹水大鼠保肝抗炎作用研究。25只清洁级Wistar大鼠,随机选5只为正常组(n=5)照常饲养,剩余20只参照Alakokko造模法构建肝硬化腹水大鼠模型。造模三周后成模大鼠共18只,随机分为模型组(n=9)和治疗组(n=9),取治疗组大鼠神阙、足三里穴敷贴水臌贴治疗,模型组用相同方法贴敷水臌贴安慰剂治疗,共给药2周,同时继续按体重个体化注射DMN。每日测量体重、腹围;给药前后分别取血、取尿;给药结束后,统计大鼠成模率及死亡率,大鼠麻醉下剖腹抽腹水,腹主动脉取血,取肝组织。检测大鼠肝功能(ALT、AST、TBil)指标的变化情况,大鼠肝脏HE染色、天狼星红染色和MASSON三色染色观察大鼠肝脏的病理变化,免疫组织化学法测定肝脏TNF-α,GSK3β,p-GSK3β,P65和Pp65蛋白的表达;ELISA法测定一氧化氮(NO)含量。结果:实验共5周,结束时大鼠成模率94.7%(建模19只大鼠,成模18只),存活率95%,死亡率5%。水臌贴治疗后治疗组大鼠在精神状态、饮食及毛色等较模型组均有不同程度的改善;且大鼠体重减轻、腹围缩小、尿量增加;观察肝脏表观形态,治疗组肝脏质地改善,肝脏色暗红,边缘毛糙不光滑,肝叶与叶之间有不同程度的粘连;水臌贴治疗后大鼠的肝功能改善,治疗组ALT、AST、TBi L均较对照组下降;通过HE染色、天狼星红染色、Masson三色染色显示肝脏组织病理学治疗组较模型组炎性细胞浸润以及纤维结缔组织增生减少,细胞外基质减少,胶原沉积减轻,说明肝脏纤维化程度降低;水臌贴的干预可以抑制肝脏TNF-a,GSK3β,P65蛋白的表达,并下调血清中NO的含量。结论:1.根据体重个体化的Alakokko造模法可以诱导稳定的肝硬化腹水大鼠模型,该法在提高成模率的同时降低死亡率。为研究肝硬化腹水提供了更优的造模方法。2.水臌贴改善肝硬化腹水大鼠的肝功能,用水臌贴治疗后大鼠的ALT、AST、TBi L均减轻,提示水臌贴有保肝作用。3.水臌贴治疗后大鼠肝脏HE染色、天狼星红染色、masson染色均显示大鼠肝脏的炎性细胞浸润及纤维结缔组织增生减轻,提示水臌贴有抗炎作用。4.水臌贴保肝抗炎作用的机制可能是通过下调TNF-α,GSK3β,P65蛋白的表达水平并抑制NO的表达来实现的。
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