论文部分内容阅读
目的:观察新加达原饮对HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg和HBV-DNA的影响,旨在为其抗病毒性肝炎的临床应用提供实验依据。
方法:
1.用MTT比色法检测药物对细胞的毒性作用:
将2×104/ml的细胞悬液加入96孔培养板中,每孔100μl,培养24h后,观察细胞贴壁良好后吸除全部培养液,将6个不同浓度的新加达原饮应用液,加入培养板中分别培养24小时、48小时、72小时,加入MTT,用酶标仪读取数值,通过公式计算半数中毒浓度TC50分别为101.39,60.95,14.22,然后取三次结果的均数(58.85mg/ml)为以下实验的起始浓度。
2.药物干预实验:
根据以上MTT法结果58.85mg/ml的药物浓度,采用等量2倍稀释法稀释,将达原饮分别稀释为浓度由高到低的5个组,依次分别为58.85mg/ml(1组)、29.425mg/ml(2组)、14.7125mg/ml(3组)、7.35625mg/ml(4组)、3.678125mg/ml(5组),拉米夫定药物浓度根据相关研究[70]中所载浓度为0.001mg/ml。将2×104/ml的细胞悬液加入培养板中培养,观察细胞贴壁良好,分别加入不同浓度的新加达原饮和拉米夫定应用液,空白组继续用培养液,分别培养72小时,144小时,收集细胞培养上清液检测。
3.酶联免疫法(ELISA)测定HBsAg,HBeAg:
用酶标仪检测细胞上清液中的HBsAg,HBeAg的含量。
4.PCR法检测HBV-DNA:
用PCR扩增仪检测细胞上清液中的HBV-DNA的含量。
结果:
1.乙肝表面抗原(HBsAg)测定:
72h新加达原饮各组及拉米夫定组与空白对照组比较均有统计学意义(P<0.01);新加达原饮组1,2,3,4组与拉米夫定组比较有统计学意义(P<0.05)。
144h新加达原饮各组及拉米夫定组与空白对照组比较均有显著统计学意义(P<0.01);新加达原饮组1,2,3,4组与拉米夫定组比较有统计学意义(P<0.05)。
2.乙肝E抗原(HBeAg)测定:
72h新加达原饮各组及拉米夫定组与空白对照组比较均有显著统计学意义(P<0.01)。新加达原饮组1,2,3,4组与拉米夫定组比较有统计学意义(P<0.05)。
144h新加达原饮组各组及拉米夫定组与空白对照组比较均有统计学意义(P<0.01);新加达原饮组1,2,3组与拉米夫定组比较有统计学意义(P<0.05)。3.HBV-DNA测定:
HBV-DNA72小时测定
新加达原饮各组及拉米夫定组与空白对照组比较有显著统计学意(P<0.01);新加达原饮组1,2,3组与拉米夫定组比较有统计学意义(P<0.05)。
HBV-DNA144小时测定:新加达原饮各组及拉米夫定组与空白对照组比较有显著统计学意义(P<0.01);新加达原饮组1,2,3,4组与拉米夫定组比较有统计学意义(P<0.05)。
结论:
新加达原饮在体外能有效抑制HepG2.2.15细胞HBsAg、HBeAg分泌和HBV-DNA的复制,具有体外抗乙型肝炎病毒的作用。