金黄色葡萄球菌是奶牛乳房炎的常见病原菌,其因生物被膜形成能力强,常用的抗菌药物对其治疗效果有限,极大的增加了金黄色葡萄球菌性奶牛乳房炎的治疗难度。而噬菌体可以高效快速裂解耐药菌,成为近年来替代抗生素的新型疗法得到广泛关注,但关于金黄色葡萄球菌噬菌体对生物被膜的作用机制研究却相对匮乏。因此,本研究深入研究乳源金黄色葡萄球菌的生物被膜形成能力和噬菌体的抑菌能力,着重分析噬菌体对生物被膜的作用,对揭示金黄色葡萄球菌噬菌体对生物被膜作用机制具有重要意义。1.采用结晶紫染色法对55株乳源金黄色葡萄球菌生物被膜形成能力进行评估,通过PCR技术检测生物被膜形成相关基因和耐药基因,并对耐药菌株进行多位点序列（MLST）分型。结果显示,34株（62%）生物被膜形成能力较强,17株（31%）生物被膜形成能力较弱,4株（7%）无生物被膜形成能力,在生物被膜形成能力强的菌株中aap、Alt、Eno、Ica A和Ica D基因的检出率相对较高,55株细菌有17株（31%）检测出mec A耐药基因,其中ST97（29%）和ST398（24%）为优势株。2.本研究从牛场污水中分离到一株金黄色葡萄球菌裂解性噬菌体命名为vB＿Sau M＿SDQ,检测其生物学特性和抑菌效果。结果显示该噬菌体最佳感染复数为0.01,潜伏期15 min,在低于50℃和p H 4.0～11.0条件下活性稳定,在非离子和两性离子洗涤剂存在的环境中活性稳定,并且对培养基和牛奶中的细菌具有明显的抑菌效果,提示vB＿Sau M＿SDQ具有良好的稳定性和抑菌能力。3.通过平板涂布法检测vB＿Sau M＿SDQ处理后生物被膜内细菌数量变化,并通过荧光显微镜和扫描电子显微镜观察噬菌体处理后生物被膜的变化,以验证噬菌体对生物被膜的清除效果。结果显示vB＿Sau M＿SDQ能够降低膜内细菌数量,并且可破坏生物被膜的完整性,表明vB＿Sau M＿SDQ能有效清除生物被膜,提示噬菌体在预防和控制细菌生物被膜方面具有重大应用潜力。4.通过RNA-Seq测序技术分析vB＿Sau M＿SDQ处理前后膜内细菌基因表达变化,以探究噬菌体对生物被膜的作用,测序结果显示共获得了1029个差异表达基因。GO富集分析显示差异基因主要富集于核糖体结构成分、r RNA结合和蛋白质合成等生物过程。KEGG富集分析显示差异基因分布在细胞的蛋白质合成、细胞进程和物质代谢途径中,对蛋白质合成的影响主要表现在核糖体结构、RNA聚合酶合成基因表达上调;对细胞进程的影响主要表现在DNA复制、细胞分裂和群体感应过程中的酶类合成基因表达变化;对物质代谢的影响主要表现在碳水化合物代谢、能量代谢、核酸代谢途径上的酶类合成基因表达变化。表明噬菌体处理后可能促进了生物被膜内细菌的蛋白质合成、有丝分裂和物质代谢,提示噬菌体处理后膜内细菌生理状态变得活跃,破坏了生物被膜结构的稳定性。