垂头菊提取物抗高原缺氧作用及线粒体保护机制研究

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目的:本文通过研究垂头菊正丁醇部位对模拟高原环境下缺氧的大鼠和小鼠的保护作用,研究其对缺氧机体的保护作用及其机制。方法:1、首先通过对垂头菊95%乙醇提取物不同萃取溶剂部位的抗缺氧活性筛选,选择出效果最好的垂头菊有效部位。利用小鼠缺氧模型,筛选出有效部位的最佳给药剂量。2、模拟大鼠高原环境缺氧实验。将大鼠随机分为正常组,缺氧模型组、阳性药物乙酰唑胺组、垂头菊正丁醇部位给药组。采用大型低压氧舱,模拟8000 m高原缺氧环境,给药后缺氧12小时。记录缺氧对大鼠生理、生化指标的影响。3、小鼠模拟高原环境缺氧实验,将小鼠随机分为缺氧模型组、阳性药物乙酰唑胺组、垂头菊正丁醇给药组,给药后缺氧12小时。通过病理和电镜切片,观察缺氧对各组小鼠脑和心肌组织的影响。检测抗氧化相关指标。4、提取模拟高原环境缺氧小鼠小鼠线粒体,测量线粒体膜电位,氧化磷酸化酶和三羧酸循环酶的活性、观察线粒体凋亡、融合及裂分相关蛋白的表达。结果:1、垂头菊95%乙醇提取物正丁醇部位活性在各提取物中效果最好。2、垂头菊正丁醇有效部位能够改善缺氧小鼠的血压、血糖,但对缺氧小鼠血液中的含氧量和钙离子浓度无显著作用,对血液中的红细胞和血小板数目也无影响。对缺氧小鼠血液中的尿素氮、乳酸脱氢酶、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、肌酐都无显著影响。3、通过病理和电镜切片可见,垂头菊正丁醇有效部位对脑神经细胞和心肌细胞有保护作用。通过抗氧化指标可见,垂头菊正丁醇部位能够维持缺氧小鼠脑组织中T-AOC、SOD、GSH-PX的活性,减少其MDA、H2O2、·OH、NO产生水平,提高心肌组织中SOD、CAT、CK的活性,降低其MDA、H2O2、·OH的产生水平。4、通过对缺氧小鼠线粒体中呼吸链和三羧酸循环相关酶的检测,垂头菊正丁醇成分能维持缺氧小鼠大脑神经元及心肌细胞中线粒体膜电位水平,提高缺氧小鼠脑线粒体中顺乌头酸酶、丙酮酸脱氢酶、线粒体复合物Ⅰ、线粒体复合物Ⅱ、线粒体复合物Ⅲ的活性,降低苹果酸脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶、线粒体复合物V的活性。在缺氧小鼠心肌细胞线粒体中,垂头菊正丁醇部位对线粒体呼吸链和三羧酸循环酶呈现与浓度正相关的保护作用。即在高浓度下,垂头菊正丁醇部位能显著提高缺氧小鼠心肌细胞线粒体中顺乌头酸酶、苹果酸脱氢酶、α-酮戊二酸脱氢酶、丙酮酸脱氢酶、线粒体复合物Ⅰ、线粒体复合物Ⅱ、线粒体复合物Ⅲ和线粒体复合物V的活性,而在中剂量和低剂量作用不明显。垂头菊正丁醇部位能提高缺氧小鼠脑线粒体中SOD、nrf-2、Mitofusin-2、Dynamin-1的蛋白表达。结论:1、垂头菊具有抗高原缺氧作用,其正丁醇部位的效果抗缺氧效果较好。2、垂头菊抗缺氧作用并非通过提高血液中氧含量而实现,而与提高机体自由基清除能力、抗氧化应激相关。3、垂头菊能够保护三羧酸循环和线粒体呼吸链关键酶,改善线粒体抗氧化能力,减少线粒体的凋亡,促进线粒体的融合和裂分。
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