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本文选择GC-1 spg(小鼠精原细胞系)、GC-2 spd(小鼠精母细胞系)和小鼠成熟精子细胞,这三种小鼠精子发生过程中不同阶段的细胞,应用miRNA基因芯片的方法,检测miRNA在其中的表达谱差异。结果获得63个在上述三种细胞中表达有差异的小鼠源miRNA。根据基因芯片的结果,筛选其中的9个miRNA通过Northem blot方法对其表达差异进行验证,结果均没有监测到成熟miRNA形式,仅有2个miRNA(mmu-miR-468,mmu-miR-490)得到了与其前体大小相符的条带。
根据基因芯片的结果,选取mmu-miR-17-3p为目标基因进行实时定量RT-PCR的预实验,PCR产物的电泳结果显示,目的条带存在,但是同时存在一些非特异性条带,需要进一步调整引物和实验条件,以得到单一的PCR目的产物,从而可通过实时定量RT-PCR的方法验证上述三种细胞中miRNA的表达差异。通过生物信息学的方法对基因芯片结果中显示差异的miRNA进行了初步的靶基因预测,将这些miRNA同本组之前得到的与精子发生相关的基因,以及其他一些可能与精子发生相关的基因之间建立初步联系。