【摘 要】
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微藻多糖具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、免疫调节等功能,被广泛应用于食品、饲料、医药、污水治理等多个领域,有重要的研究价值。本研究以海洋小球藻（Chlorella sp.）作为研究对象,采用DEAE-52纤维素阴离子交换柱分离纯化小球藻胞外多糖,对其纯化组分CEP4进行结构表征;研究纯化多糖CEP4对小鼠RAW264.7巨噬细胞的免疫调节活性。采用转录组测序技术分析CEP4对巨噬细胞免疫调节潜在的分子
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微藻多糖具有抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、免疫调节等功能,被广泛应用于食品、饲料、医药、污水治理等多个领域,有重要的研究价值。本研究以海洋小球藻（Chlorella sp.）作为研究对象,采用DEAE-52纤维素阴离子交换柱分离纯化小球藻胞外多糖,对其纯化组分CEP4进行结构表征;研究纯化多糖CEP4对小鼠RAW264.7巨噬细胞的免疫调节活性。采用转录组测序技术分析CEP4对巨噬细胞免疫调节潜在的分子机制。经DEAE-52分离纯化得到了小球藻胞外多糖CEP4,红外光谱分析表明CEP4是一种β-硫酸多糖,由分子量为2394.889 k D和67.759 k D的多糖组成。单糖成分分析结果表明CEP4由鼠李糖、阿拉伯糖、盐酸氨基葡萄糖、半乳糖、N-乙酰-D氨基葡萄糖、木糖和葡萄糖醛酸7种单糖组成,其摩尔比为0.037:0.083:0.408:0.026:0.077:0.086:0.210。体外免疫活性实验表明,CEP4能够激活巨噬细胞的免疫活性,0.75-6μg/m L浓度的CEP4对巨噬细胞的增殖有促进作用,并呈剂量依赖性诱导巨噬细胞分泌NO和IL-6和TNF-α,同时还降低了巨噬细胞上清中IL-10的含量。转录组测序分析获得了4824个差异表达的基因,GO富集分析显示,CEP4主要影响巨噬细胞的生物过程（BP）,在这些BP中,显著差异表达的基因如:Ccr2、Ccl3、Cx Cr3、Gpr183、Il27、Tlr7等与免疫功能相关。KEGG富集到19条显著富集的信号转导通路,其中Toll样受体信号传导途径,胞质DNA传感途径和C型凝集素受体信号传导途径与免疫系统有关,这些结果表明,CEP4通过多条信号途径对巨噬细胞的免疫调节发挥作用。对DEGs进行PPI互作分析并构建了PPI网络,PPI网络由137个几点组成,通过计算获得的一系列hub gene,其中部分基因如Hsp90ab1,Rbx1,Isg15,Snrpd2,Polr2f,Uqcrh,Psmb8,Psmb6,Rpsa和Orc1与免疫功能相关。本研究获得的小球藻胞外多糖CEP4具有免疫调节作用,并通过转录组测序初步揭示了CEP4刺激巨噬细胞发挥免疫调节活性的潜在机制,为小球藻胞外多糖作为免疫调节剂的开发利用提供了科学依据。
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