脂肪酶是一种重要的工业酶，在自然界中普遍存在，目前许多脂肪酶基因已被克隆，并获得相应高效表达的工程菌。扩展青霉脂肪酶是一种中温碱性脂肪酶，可在碱性条件下分解三酰甘油酯,在工业上有着广泛的应用。本研究以扩展青霉（Penicillium expansum）CICC 40356 为出发菌，利用PCR和RT-PCR 克隆了扩展青霉脂肪酶基因（PEL）及其开放阅读框（ORF），并对基因中低使用频率密码子进行了优化，使其在异源宿主Pichia pastoris GS115中获得了理想的表达效果，并对重组脂肪酶的酶学性质进行了初步研究。主要工作如下。　　 (1)分别利用PCR和RT-PCR 克隆了扩展青霉（P. Expansum）CICC 40356脂肪酶基因（PEL）及其开放阅读框（ORF）。序列分析显示该基因由6个外显子和个内含子组成，基因全长1140 bp，ORF为858 bp，编码286个氨基酸残基，与GenBank中已报道的PEL基因序列的同源性为99%。　　 (2)外源蛋白的异源表达水平与多种因素有关，其中密码子偏爱性是重要影响因素。为了获得高效表达的扩展青霉脂肪酶，利用重叠延伸PCR（Over-lap extensionPCR）技术对PEL的10个氨基酸密码子和表达载体pPIC9Kα信号肽的9个氨基酸密码子进行了优化，获得了改造过的脂肪酶基因PELM和表达载体pPIC9KM。　　 并构建了带有脂肪酶自身信号肽的pPIC9K-PEL1、pPIC9KM-PELM1、pPIC3.5K-PEL1、pPIC3.5K-PELM1和不带有脂肪酶自身信号肽的pPIC9K-PEL2、pPIC9KM-PELM2 六个重组质粒。表达载体经Sal I 线性化后电转化至P.pastorisGS115中进行表达。经过MD、MM、活性功能检测平板及G418 筛选得到最佳毕赤酵母GS115转化子，在摇瓶中甲醇诱导发酵100h后，利用pNPP 比色法测得发酵上清的酶活分别为3.65 U/ml，30.49 U/ml，90.85 U/ml，212.05 U/ml，15.29 U/ml，76.32 U/ml。发酵上清液经硫酸铵沉淀、透析，透析产物经SDS-PAGE检测，发现28 kDa 左右的特异性蛋白条带。　　 (3)对重组扩展青霉脂肪酶的酶学性质进行了初步研究。结果表明：扩展青霉脂肪酶的最适温度为35℃，最适pH为9.5，在pH 7.0-10.0 范围内该脂肪酶均较稳定；最适底物为C8，对中链酯（C8-C12）有较强的水解能力；Ca2+和Mg2+对其有激活作用，Fe2+，Zn2+，Cu2+则有抑制作用，EDTA能使之快速失活。