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背景与目的：胰腺癌是一种以起病隐匿、生长迅速并早期转移为特征的消化系统恶性肿瘤,是死亡率最高的恶性肿瘤之一,目前尚无有效的治疗措施,其发病率在世界范围内呈逐年上升趋势。由于胰腺组织的解剖位置关系,早期症状不明显且缺乏有效的检测手段,大多数患者就诊时已为中晚期,预后差,5年生存率不足5%。早期发现与早期诊断是改善胰腺癌患者预后的有效措施之一。因此,寻找早期诊断、特异性强、灵敏度高的肿瘤分子标记物对于改善胰腺癌患者的预后具有重要的临床意义,同时也能为胰腺癌新型靶向治疗技术提供依据。B7-H4(也称为B7S1或B7x)是新近发现的B7家族成员,能抑制T细胞增殖、细胞因子产生和细胞周期的进行,从而抑制T细胞介导的免疫应答。B7-H4在肿瘤免疫应答中起重要作用。B7-H4mRNA的在脾、肺、胸腺、胎盘、肝、肾等正常组织中均有表达,然而,免疫组化显示,B7-H4蛋白在正常外周组织中几乎没有阳性表达,而在一些肿瘤组织中有丰富表达,例如乳腺癌、卵巢癌、肾癌、前列腺癌和非小细胞肺癌,并与肿瘤进展密切相关。鉴于目前尚无可用于多种方法检测B7-H4表达的抗体出售,本研究以稳定表达B7-H4的3T3-B7-H4细胞为免疫原,制备了能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并对其进行了生物学特性分析。同时,应用免疫组织化学染色检测B7-H4在胰腺癌组织中的表达,探讨B7-H4的表达与胰腺癌临床病理特征之间的关系,分析B7-H4在胰腺癌诊疗及预后判断等方面的潜在价值。方法：1.以稳定表达B7-H4胞外段的3T3-B7-H4细胞为免疫原,免疫Babl/C小鼠；应用常规杂交瘤技术将免疫的小鼠脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,使用间接ELISA方法筛选分泌抗B7-H4单克隆抗体的杂交瘤细胞株。并对所获得的单克隆抗体进行亚型鉴定,使用Western blotting、免疫沉淀等方法对单克隆抗体特异性进行鉴定。2.利用制备的小鼠抗B7-H4单克隆抗体,通过免疫组化(IHC)等方法分析B7-H4在胰腺癌组织中的表达特征,并评价其与临床病理特征的关系。结果：1.获得1株亚型为IgM、轻链为κ型的针对B7-H4的鼠源单克隆抗体：特异性抗B7-H4的单抗3E8能用于免疫沉淀(IP)及IHC等方法检测组织及细胞中的B7-H4表达。2.免疫组化显示：胰腺癌组织中B7-H4在胞浆和(或)胞膜弥漫表达,表达量显著高于正常胰腺组织(P<0.05)。B7-H4在临床肿瘤分级较高患者的胰腺癌组织及有淋巴结转移患者的胰腺癌组织中表达显著增强。结论：成功获得了特异性抗B7-H4的单克隆抗体,B7-H4在胰腺癌组织中表达上调,并与患者肿瘤分级和淋巴结转移密切相关。