烟草黑胫病是一种危害非常严重的土传病害,筛选对烟草黑胫病有良好生防效果的生防微生物并应用到生产实践中对烟草安全生产有重要意义。试验于2014年6月至10月在山东烟草研究院进行拮抗菌的分离筛选试验,2014年11月-2015年8月在河南农业大学许昌校区现代烟草农业科教园区进行盆栽和大田验证试验,以及拮抗菌发酵条件优化试验,主要研究结果如下:1、烟草黑胫病拮抗菌的分离筛选鉴定从黑胫病高发烟田选择健壮无病烟株,取其根际土,用本实验室筛选的烟草疫霉菌株WZL-072进行筛选,初筛得到26株纯培养拮抗细菌,8株纯培养拮抗真菌。经平板对峙实验复筛得到1株抑菌率较高的拮抗真菌YCG-2,抑菌率达到84.34%;6株抑菌率较高的拮抗细菌,抑菌率67.42%-77.27%。通过对抑菌率最高的真菌YCG-2进行形态学和分子生物学鉴定,经鉴定该菌株与木霉中的哈茨木霉(Trichoderma harzianum)的亲缘关系较近,且形态与培养特征与哈茨木霉菌相符,因此鉴定该菌株为哈茨木霉。2、YCG-2菌株配施高碳基土壤修复肥对烟草黑胫病的盆栽防效用孢子液蘸根法研究YCG-2菌株配施高碳基土壤修复肥对烟草黑胫病的盆栽防效,试验结果表明:YCG-2菌株配施高碳基土壤修复肥对烟草黑胫病有较好的防治效果。用YCG-2处理的烟株病情指数为28.33b,对照处理的烟株病情指数为66.67,防治效果57.45%。试验同时开展了高碳基土壤修复肥与YCG-2孢子液结合处理试验,结果表明:高碳基土壤修复肥与YCG-2孢子液配施处理的烟株病情指数为25,只施高碳基土壤修复肥处理的烟株病情指数为62.5,防治效果为60.01%。与仅施用YCG-2孢子液处理的烟株相比,增施高碳基土壤修复肥处理的防效有所增加,但两者之间差异不显著,说明增施高碳基土壤修复肥对YCG-2菌株预防烟草黑胫病能力的提高没有明显的促进作用。3、YCG-2菌株配施高碳基土壤修复肥对大田烟株生长影响用孢子液蘸、灌根法及叶面喷施法研究YCG-2菌株配施高碳基土壤修复肥对大田烟株生长的影响。结果表明YCG-2菌株配施高碳基土壤修复肥小区烟草花叶病发病率和病情指数分别为4.94%-5.76%、2.88-3.70,烟草赤星病发病率与病情指数分别为3.02%-3.29%、0.82-0.89,相比于对照处理两种病害的发病率病情指数22.99%、15.51和4.24%、1.50,发病率与病情指数大大降低。因此YCG-2菌株配施高碳基土壤修复肥可以有效降低烟草花叶病及赤星病的发病率和病情指数,说明YCG-2菌株孢子液对烟株发育的作用主要是通过抑制侵染根系的微生物活动、促进根系发育良好,提高了烟株的营养抗性。,灌根处理和灌根加叶面喷施处理之间对大田烟株病情指数的影响差异不显著,说明YCG-2菌株孢子液的施加方式对大田烟株病情指数无影响,叶面喷施YCG-2菌株孢子液并不能增强其降低大田病害的能力。YCG-2菌株与高碳基土壤修复肥配施能够促进烟株生长发育,对烟株高度,叶片数,最大叶面积,节间距,茎围都有明显的促进作用,YCG-2菌株与高碳基土壤修复肥配施使烟株高度增加了20-30 cm,叶片数增加2-3片,最大叶面积增加约500 cm2,节间距增加1cm左右,茎围增加了2-3 cm;YCG-2菌株与生物炭配施可以增加烟株根、茎、叶干物质积累量、烟叶叶绿素a、叶绿素b、类胡萝卜素的含量,但效果不明显。灌根处理烟株和灌根加叶面喷施处理之间对大田烟株上述性状的影响差异不显著,因此叶面喷施YCG-2菌株孢子液并不能更进一步促进烟株的生长。4、YCG-2菌株发酵条件优化通过发酵条件优化单因素试验得到YCG-2菌株最优发酵条件为每500毫升瓶20 g菇渣,料水比为1:3.0,种子液接种量1×107cfu·g-1,p H7.0,温度28℃,恒温恒湿培养箱中培养6d。孢子产生条件正交试验表明在装料量20g蘑菇渣,培养温度28℃,料水比1:3.0条件下,YCG-2产孢量最多,平均产孢量为40.18?108cfu·g-1。结论:以本实验室的烟草疫霉菌株WZL-072为病原菌,从烟草根际土筛选得到一株黑胫病拮抗菌YCG-2,经形态学和分子生物学鉴定为哈茨木霉(Trichoderma harzianum)。盆栽试验表明YCG-2配施高碳基土壤修复肥对黑胫病的防效达到60.01%,大田试验表明YCG-2配施高碳基土壤修复肥可以有效降低烟草花叶病及赤星病的发病率和病情指数,促进烟株生长发育。发酵条件优化试验表明YCG-2菌株最适培养条件为:28℃、p H7.0、料水比为1:3.0。