目的:本实验通过研究川楝子炮制前后的化学成分及毒性变化,探讨其炮制减毒机理,为川楝子炮制品的合理临床应用提供实验依据。方法:1.川楝子不同炮制品的川楝素含量研究:参照2015年版《中国药典》采用HPLC检测不同川楝子炮制品中水分和川楝素含量,比较各炮制品间川楝素含量的差异。2. 川楝子不同炮制品对小鼠急性毒性的比较研究:将昆明种小鼠随机分为正常组和川楝子不同炮制品组,正常组灌予生理盐水,炮制品组分别灌予川楝子不同炮制品40m L·kg^-1,连续观察14 d,期间记录小鼠的一般行为学观察和体重变化情况,14 d后,取血检测血清中ALT、AST活力,取肝脏、脾脏、心脏、肾脏、肺脏称重并计算脏器系数。3. 川楝子不同炮制品对小鼠急性肝毒性“量-时-毒-效”关系研究:（1）“时-毒”关系:将昆明种小鼠随机分为正常组和川楝子不同炮制品组分别灌予最大耐受量（MTD）,在给药后1、2、6、12、24、48、72h,取血检测血清中ALT、AST活力,取肝脏、脾脏、胸腺称重并计算脏器系数,光学显微镜下观察肝组织形态变化。（2）“量-毒”关系:将昆明种小鼠随机分为正常组和川楝子不同炮制品组,根据预试验结果,生品组设置7个剂量组,分别为MTD、0.85MTD、0.85²MTD、0.85³MTD、0.85⁴MTD、0.85⁵MTD、0.85⁶MTD;醋炙品组、炒焦品组、盐炙品组设置3个剂量组,分别为MTD、0.85MTD、0.85²MTD;酒炙品组设置6个剂量组,分别为MTD、0.85MTD、0.85²MTD、0.85³MTD、0.85⁴MTD、0.85⁵MTD;分别寻找出各炮制品的最低中毒剂量。给药后2 h,检测血清中ALT、AST活力,取肝脏、脾脏、胸腺称重并计算脏器系数,光学显微镜下观察肝组织形态变化。（3）“量-效”关系:将昆明种小鼠随机分为正常组和川楝子不同炮制品组,根据预试验结果,生品组设置7个剂量组,分别为1/3*MTD、1/3*0.85MTD、1/3*0.85²MTD、1/3*0.85³MTD、1/3*0.85⁴MTD、1/3*0.85⁵MTD、1/3*0.85⁶MTD;醋炙品组、酒炙品组、炒焦品组、盐炙品组设置3个剂量组,分别为1/3*MTD、1/3*0.85MTD、1/3*0.85²MTD;分别灌予川楝子不同炮制品1h后,测定小鼠的热水绷尾时间。4.川楝子不同炮制品致小鼠肝毒性氧化损伤机制研究:将昆明种小鼠随机分为正常组和川楝子不同炮制品组,各炮制组均采用最大中毒剂量、亚中毒剂量、最大无毒剂量作为肝毒性氧化损伤实验的剂量考察,给药后2 h,按照试剂盒方法测定肝组织中SOD、GSH-Px、CAT、XOD活性和MDA、GSH含量,比较各炮制品间过氧化损伤程度。5.川楝子不同炮制品对人正常肝细胞L02线粒体功能的影响:以人正常肝细胞系L02细胞为研究对象,采用MTT法检测川楝子不同炮制品对L02细胞活性的影响,用500μg/m L、125μg/m L、31.25μg/m L川楝子生品、醋炙品、酒炙品、炒焦品、盐炙品各处理48小时后,测定线粒体复合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ的活性。结果:1.川楝子不同炮制品的川楝素含量研究:川楝子不同炮制品中的含水量均未超过15%。5种炮制品川楝素结果显示:炒焦品（0.113）>生品（0.097）>酒炙品（0.096）>盐炙品（0.094）>醋炙品（0.089）。与生品相比,醋炙品的川楝素含量显著降低（P<0.01）;炒焦品的川楝素含量显著升高（P<0.01）;酒炙品和盐炙品中川楝素含量无明显变化。2.川楝子不同炮制品对小鼠急性毒性的比较研究:一般行为学观察发现,给予生品、醋炙品、酒炙品、炒焦品和盐炙品后,小鼠均出现不同程度的舔身体和挠头现象,且给予大剂量炒焦品和盐炙品后,雄性小鼠出现了脱毛现象。体重变化情况发现,与正常组比较,生品组、盐炙品组、醋炙品组、酒炙品组雌性小鼠体重结果均无明显差异,而炒焦品组第1 d体重值显著下降（P<0.05）。与正常组比较,盐炙品组、炒焦品组、醋炙品组雄性小鼠体重结果均无明显差异,而生品组第2 d体重值显著下降（P<0.01）,酒炙品组第1 d体重值显著下降（P<0.05）。脏器系数结果表明,与正常组肝脏系数相比,一次性给予大剂量的生品、醋炙品、酒炙品和盐炙品14 d后均可引起雌雄小鼠肝脏肿大,肝脏系数显著升高（P<0.05或P<0.01）。ALT和AST活力结果表明,一次性分时间段灌予雌雄小鼠生品、醋炙品、酒炙品、炒焦品、盐炙品累积最大剂量14 d后,血清中ALT值与正常组相比,有升高的趋势,而AST值则表现出不同程度明显升高。3.川楝子不同炮制品对小鼠急性肝毒性“量-时-毒-效”关系研究:“时-毒”关系研究结果表明,与正常组相比,生品组给药后1～12 h血清ALT、AST值均有不同程度的升高,呈一定的“时-毒”关系,ALT、AST值均在给药后2 h达到高峰,ALT值毒性持续时间约12 h,AST值毒性持续约6 h,肝组织出现肝细胞弥漫中度水变性,可见个别点状坏死灶,肝细胞散在小灶状脂肪变性。与生品组相比,醋炙品组、酒炙品组、炒焦品组、盐炙品组给药后血清中ALT和AST值毒性持续时间缩短,肝组织病理损伤程度降低,且酒炙品组给药后12 h血清ALT值显著降低（P<0.05）,炒焦品组给药后2 h和12 h血清ALT值显著降低（P<0.01）,盐炙品组给药后2 h血清ALT和AST值显著降低。生品、醋炙品给药后24 h出现肝脏肿大,肝脏系数显著升高。“量-毒”关系研究结果表明,生品组最低中毒剂量为0.85³MTD,最大无毒剂量为0.85⁴MTD。而醋炙品组、炒焦品组、盐炙品组最低中毒剂量为0.85MTD,最大无毒剂量为0.85²MTD,与生品组相比,其中毒剂量范围缩短。酒炙品最低中毒剂量为0.85⁴MTD,最大无毒剂量为0.85⁵MTD,与生品组相比,其中毒剂量范围增大。镜下观察,生品组肝组织出现肝细胞弥漫中度水变性,可见个别点状坏死灶,汇个别汇管区少量炎症细胞浸润。与生品组相比,醋炙品组、炒焦品组、盐炙品组肝组织病理损伤程度稍有减轻。“量-效”关系研究结果表明,与正常组相比,1/3*0.85²MTD生品、1/3*0.85⁵MTD生品、1/3*0.85MTD醋炙品、1/3*0.85MTD炒焦品和1/3*0.85²MTD盐炙品绷尾时间显著延长（P<0.05）,但未表现出明显的“量-效”关系。4. 川楝子不同炮制品致小鼠肝毒性氧化损伤机制研究:与正常组相比,生品升高小鼠肝组织中MDA含量,降低CAT、GSH-Px活性和GSH含量,升高XOD活力,从而导致小鼠肝毒性的发生。醋炙品升高肝组织中MDA含量,降低CAT活性,但SOD、GSH-Px、XOD活力和GSH含量均无明显差异。酒炙品升高MDA含量,降低CAT、GSH-Px活性,升高XOD活力,但SOD活力和GSH含量均无明显差异。炒焦品可以降低CAT、GSH-Px活力,升高XOD活性,降低GSH含量,但SOD活性和MDA含量无明显差异。盐炙品可以降低CAT活力,但SOD、GSH-Px、XOD活力和GSH、MDA含量无明显变化。5. 川楝子不同炮制品对人正常肝细胞L02线粒体功能的影响:生品和酒炙品对L02细胞的抑制作用较明显。与正常组相比,生川楝子在125～2000μg/m L能够显著抑制L02细胞的增殖作用（P<0.05或P<0.01）。与生品各剂量组相比,醋炙品和盐炙品在62.5～2000μg/m L能显著增强对L02细胞的增殖作用（P<0.05或P<0.01）;炒焦品各剂量组均无显著变化;而酒川楝子在62.5～500μg/m L却能降低对L02细胞的增殖作用（P<0.05或P<0.01）。川楝子各炮制品体外对L02细胞的毒性作用顺序为:酒炙品>生品>炒焦品>盐炙品>醋炙品。与正常组相比,川楝子生品对线粒体呼吸酶链复合物酶Ⅰ-Ⅳ活性均有显著抑制作用（P<0.05或P<0.01）。与生川楝子各相应剂量比较,醋炙品高剂量可显著降低对线粒体呼吸酶链复合体Ⅰ、Ⅲ的抑制作用（P<0.05）;炒焦品高剂量可显著降低对线粒体呼吸酶链复合体Ⅰ的抑制作用（P<0.05）;盐炙品高剂量可显著降低对线粒体呼吸酶链复合体Ⅰ的抑制作用（P<0.05）。结论:生品可引起明显的肝毒性,呈一定的“量-时-毒”关系。醋炙品、炒焦品、盐炙品可明显降低小鼠肝脏毒性,主要表现为毒性持续时间缩短,毒性剂量范围缩小,肝组织病理损伤程度减轻,而酒炙品的肝毒性反而增强。醋炙品、炒焦品、盐炙品的炮制减毒机制可能与氧化应激损伤程度下降、线粒体功能障碍减轻有关。