杂种一代梅大与亲本大白肌肉组织间差异表达基因的筛选、鉴定及其初步分析

来源 :华中农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xieming15898575325
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
杂种优势的产生与亲本和子代间基因的差异表达密切相关。本研究以同日龄大白猪和梅大猪的背最长肌为实验材料,采用抑制消减杂交技术,构建了猪杂种一代与亲本肌肉组织间正反向消减cDNA文库,并对文库进行了筛选和鉴定,获得了一部分差异表达片段。为进一步分离、鉴定与杂种优势相关的基因、从基因表达水平上深入探讨杂种优势的遗传机理奠定基础。获得的主要结果如下: (1)以管家基因β-肌动蛋白(β-actin)为消减指标检测两个文库的消减效率,以梅大为Tester和以大白为Tester的文库的消减效率分别为215、210。表明文库质量较好,可做后续研究。 (2)将两个文库的cDNA片段分别连接到pGEM-T载体并转化大肠杆菌JM109。随机挑取白色重组体,获得了包含近1500个克隆的质粒文库。 (3)PCR检测质粒文库中插入片段的有无和大小,只选取电泳检测扩增产物条带单一且明亮者,分别获得了700和623个阳性克隆。插入片段多集中在150~600bp。 (4)从梅大消减文库中随机挑选200个克隆做斑点杂交,检测到39个差异表达片段;从大白消减文库中随机挑选150个克隆做斑点杂交,检测到21个差异表达片段。 (5)对梅大消减文库中的39个差异表达片段测序,经BLASTN、BLASTX分析,除去冗余序列,发现他们共代表6个不同的基因,分别为人剪接体蛋白SAP 155、猪3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PDH)基因、人肌球蛋白结合蛋白H基因、猪肌球蛋白轻链基因、猪整合素亚基β-1、猪细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因。 (6)对大白消减文库中的21个差异表达片段测序,经BLASTN、BLASTX分析,除去冗余序列,发现他们共代表1个不同基因,即猪3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PDH)基因。 (7)采用RT-PCR方法验证上述部分片段是否为真实差异表达,发现整合素亚基β1(integrin beta-1 subunit,CD29)基因在梅大中为真实差异表达。
其他文献
水牛是我国南方主要的畜种,随着我国生产力水平的提高,水牛的役用性正在部分的被机械取代,而水牛的肉用性和乳用性得到越来越多的关注。myostatin是控制肌肉生长的一个关键基
近年来,胚胎移植技术在短期内扩大优良种用山羊的数量方面发挥了重要作用。但在实践中,胚胎移植的成功率仍不稳定。国内外已有不少学者在提高胚胎移植成功率方面进行了大量研究
该文以吉林西部地区重要的作物——玉米为研究对象,研究了玉米——苜蓿垄间间作的可行性和效益分析,并对饲料玉米的生产一些方面进行了研究,以8种玉米品种为研究对象提出了饲
土鳖虫是一味传统的活血化瘀类中药材,含有丰富的活性成分且医药应用广泛。随着医学和分子生物学技术的不断发展,国内外学者对土鳖虫的研究越来越深入,更多的药用价值被发现,
该试验共分三个部分.第一部分:通过酸不溶灰分法(AIA)和跟踪测定法对放牧内蒙古白绒山羊不同季节的放牧采食量进行测定,并比较了牧草中养分含量的变化.结果显示,两种方法测定
本文通过绿色微囊藻、小球藻、20%鱼油+80%酵母、纯酵母分别喂养大型溞,研究它们对大型潘生长、生殖的影响,并研究了它们喂养的大型溞所产幼体的抗逆性。同时采用生化分离技术、
家蚕的胰凝乳蛋白酶抑制剂(Chymotrypsin inhibitor,CI)在维持家蚕的正常生长发育中具有重要作用。迄今为止,人们已经对其遗传规律、在染色体上的定位、分离纯化、蛋白的基本
随着集约化养鸡生产的快速发展,肉鸡脂肪过度沉积导致肉品质下降和能量浪费问题日益严峻,如何通过调控脂肪沉积来改善肉质成为近年来的研究热点。能量是所有生命代谢和饲料营