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杂种优势的产生与亲本和子代间基因的差异表达密切相关。本研究以同日龄大白猪和梅大猪的背最长肌为实验材料,采用抑制消减杂交技术,构建了猪杂种一代与亲本肌肉组织间正反向消减cDNA文库,并对文库进行了筛选和鉴定,获得了一部分差异表达片段。为进一步分离、鉴定与杂种优势相关的基因、从基因表达水平上深入探讨杂种优势的遗传机理奠定基础。获得的主要结果如下: (1)以管家基因β-肌动蛋白(β-actin)为消减指标检测两个文库的消减效率,以梅大为Tester和以大白为Tester的文库的消减效率分别为215、210。表明文库质量较好,可做后续研究。 (2)将两个文库的cDNA片段分别连接到pGEM-T载体并转化大肠杆菌JM109。随机挑取白色重组体,获得了包含近1500个克隆的质粒文库。 (3)PCR检测质粒文库中插入片段的有无和大小,只选取电泳检测扩增产物条带单一且明亮者,分别获得了700和623个阳性克隆。插入片段多集中在150~600bp。 (4)从梅大消减文库中随机挑选200个克隆做斑点杂交,检测到39个差异表达片段;从大白消减文库中随机挑选150个克隆做斑点杂交,检测到21个差异表达片段。 (5)对梅大消减文库中的39个差异表达片段测序,经BLASTN、BLASTX分析,除去冗余序列,发现他们共代表6个不同的基因,分别为人剪接体蛋白SAP 155、猪3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PDH)基因、人肌球蛋白结合蛋白H基因、猪肌球蛋白轻链基因、猪整合素亚基β-1、猪细胞色素氧化酶亚基Ⅰ基因。 (6)对大白消减文库中的21个差异表达片段测序,经BLASTN、BLASTX分析,除去冗余序列,发现他们共代表1个不同基因,即猪3-磷酸甘油醛脱氢酶(G3PDH)基因。 (7)采用RT-PCR方法验证上述部分片段是否为真实差异表达,发现整合素亚基β1(integrin beta-1 subunit,CD29)基因在梅大中为真实差异表达。