论文部分内容阅读
研究目的:为了探索卵巢发育和功能不断成熟完善的过程是否涉及SDF-1/CXCR4轴的动态调控?本研究拟检测SDF-1和CXCR4在不同发育阶段雌性小鼠卵巢的表达,并构建卵巢早衰(Premature Ovarian Failure,POF)小鼠模型探索SDF-1/CXCR4轴与卵巢功能的关系。方法:1.按发育时期将ICR雌性小鼠分为三组,性成熟前期组(4周)、性成熟期组(7周)和适龄繁殖期组(10周),每组10只。每组5只收集卵巢,提RNA后qPCR检测SDF-1/CXCR4 mRNA表达;HE染色后行卵泡计数;免疫组化检测SDF-1/CXCR4表达定位。余下5只促排卵获取COCs后分离卵母细胞和卵丘颗粒细胞,分别提取RNA后qPCR检测SDF-1/CXCR4 mRNA表达。2.20只7周左右的ICR雌鼠用于构建POF模型,分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组5只。低、中、高剂量组小鼠分别给予140 mg/kg CTX和35 mg/kg Bus、160 mg/kg CTX和40 mg/kg Bus、200 mg/kg CTX和50 mg/kg Bus腹腔注射处理。对照组腹腔注射等体积溶剂。观察小鼠动情周期改变。两周后取小鼠卵巢,测定脏器系数,HE染色后行卵泡计数,qPCR检测SDF-1/CXCR4mRNA表达。结果:1.与性成熟前期组相比,性成熟期组和适龄繁殖期组小鼠卵巢SDF-1mRNA表达水平降低(P<0.05),受体CXCR4 mRNA的表达则明显增高(P<0.01)。2.HE染色显示3组小鼠卵巢均可见发育正常的各级卵泡;适龄繁殖期组卵泡总数和初级卵泡数显著高于其余两组(P<0.01);与性成熟期组相比,适龄繁殖期组次级卵泡数明显增多(P<0.01)。3.免疫组化表明SDF-1及CXCR4在3组小鼠卵巢各级卵泡中均有表达,且主要定位于卵泡颗粒细胞和卵母细胞胞质。4.在COCs中,适龄繁殖期组卵丘颗粒细胞SDF-1 mRNA表达水平明显高于其余两组(P<0.01);性成熟期组卵母细胞的SDF-1 mRNA表达水平明显高于性成熟前期组(P<0.05);性成熟前期组卵丘颗粒细胞CXCR4 mRNA明显低于其余两组(P<0.05)。5.小鼠进行化疗药腹腔注射后,动情周期发生改变。两周后化疗药给予组卵巢脏器系数均明显低于对照组(P<0.01),卵泡总数和初级卵泡数减少(P<0.01);卵巢组织结构被破坏,间质增加,空洞增多,颗粒细胞排列疏松。中、高剂量组卵巢颗粒细胞间隙增宽。6.随着化疗药用量增加,卵巢损伤加重,SDF-1及CXCR4 mRNA水平呈现出先上升后下降的趋势,但与对照组相比无显著性差异。结论:SDF-1及其受体CXCR4可能通过调节卵泡颗粒细胞和卵母细胞功能促进卵巢发育和功能成熟,同时促进排卵。SDF-1及CXCR4可能对化疗药诱导的卵巢功能损伤具有修复作用,且组织损伤严重时SDF-1/CXCR4轴对受损卵巢的修复能力会受到抑制。