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阿维拉霉素是一种正糖霉素族中的寡糖类抗生素,作为一种新型促进消化和代谢调节饲料药物添加剂,以其高安全性、低毒性以及低残留被欧盟等国家批准使用。本文通过诱变及基因组重排的方法并结合利福平抗性压力,选育了高产阿维拉霉素生产菌。通过rpoB序列分析,阐述了重组菌利福平遗传抗性及代谢特性。建立了发酵液中阿维拉霉素无盐相液相色谱测量法。经过四轮诱变与两轮原生质体融合,得到2株融合高产菌株G2-10与G2-31,其阿维拉霉素效价分别达到2242.64mg/L与2471.41mg/L,是原始菌株11-10的3.16倍和3.48倍。经连续传代试验,菌株性状稳定,表现出较高的工业应用潜力。重组菌G2-31的利福平抗性较原始菌株有较大提高(800mg/L)。 rpoB基因测序表明RpoB蛋白多肽链中存在点突变,G61D, S76N以及C104A,其中S76N突变与文献报道一致。原始菌株与突变株生长及产物合成特性比较研究表明,突变株阿维拉霉素合成存在二次积累期。突变株生长停滞期比较长。低产突变株与高产突变株的主要区别在于阿维拉霉素二次积累期的长短,并与生物量关联。高产菌株在前期快速生长阶段菌丝生物量增加,阿维拉霉素几乎不合成；阿维拉霉素在生长停滞阶段细胞有明显的积累,且在生长后期继续积累。二次积累期是从生长到凋亡的一个小型周期。由此可推测阿维拉霉素代谢产物的积累主要在菌丝生长停滞期及凋亡延滞前期。基于预混剂阿维拉霉素的测定方法,本文针对菌株发酵液的特殊性,重新建立了无盐相方法并通过质谱验证。确定的色谱条件为：色谱柱：C18(230mm×4.6mm,5μm)柱,柱温：30℃,流速：1mL/min,检测波长：220nm,进样量：20μL,以梯度方法调整流动相A液(色谱纯甲醇)与B液(超纯水)的比例。在该色谱条件下,发酵液中阿维拉霉素浸提样品中各组分分离效果比较好,色谱峰峰型对称。经液质联用,验证了发酵液中阿维拉霉素单组分阿维拉霉素A和阿维拉霉素B的出峰时间分别为33min和22.9min,并且此方法应用于预混剂中阿维拉霉素检测时也能很好的分离。