灵芝是我国传统的名贵中药,其含有的活性成分主要是灵芝多糖与灵芝三萜类化合物。现在市面上存在大量的灵芝类保健品,添加了灵芝成分的化妆品、护肤品等,随着社会压力与人口老龄化的加剧,各个年龄段的人群对健康都日益重视。随着对灵芝的药理功效等的研究越来越深入透彻,以及人们对于药食同源等理念愈加广泛的接受,可以预见未来市场对于灵芝产品的需求也将会更加旺盛。因此科研与产业都急需要高品质的原材料原料用于产品的研发,然而由于近年来灵芝的育种技术缺乏创新,导致市场需要的高多糖含量的专用种质资源十分匮乏。所以本论文拟以高多糖的菌株为出发菌株,利用紫外和ARTP诱变技术,对出发菌株的原生质体进行诱变处理,以获得高多糖的诱变菌株。本论文的取得生物主要研究成果如下:(1)优化出优良出发菌株的筛选与原生质体制备条件对于出发菌株进行了原生质体的优化与原生质体活力的鉴定,得到原生质体最佳制备条件为菌丝体第8天,酶解时间为3h,酶解温度为31℃,收集原生质体离心力为1811g,该条件下制备的原生质体浓度达到1.3×10~8,且经过染色鉴定原生质体活力证实活力良好,在普通再生平板上的原生质体的再生率可达到4‰。(2)获得了紫外和ARTP的优化诱变处理条件对G157制备得到的原生质体分别进行紫外照射与ARTP诱变处理条件的优化,发现紫外照射原生质体达到70%左右的致死率的时长为4s。通过响应法,对ARTP诱变的条件进行优化,发现得到当处理条件为通气量=9.8slm,处理时长=12.88s,原生质体加样体积=30μL时,ARTP对于原生质体的致死率达到90%。通过对于ARTP诱变菌株的体细胞不亲和实验发现,通气量与处理的时长与突变率都成正比例关系,当处理时长超过35s时,通气量对突变率的影响开始降低。(3)获得了19株高多糖含量的诱变菌株对104株诱变菌株进行摇瓶发酵并筛选出多糖含量高于出发菌株的诱变菌株。共有19株菌株的多糖含量超过出发菌株G157,其中有12株菌株的多糖含量超过出发菌株的5%,其中A-434,A-194,A-197这3个菌株的多糖含量与出发菌株相比,多糖含量提高了20%,其中A-434菌株最高,提高了46%。经过对高多糖诱变菌株的生物量进行对比,发现生物量提高的比例达到58%,其中A-434,A-316,A-147,A-141,A-189,A-227,A-148,A-194,A-197,A-246,A-51共11株的生物量均超过了出发菌株,其中A-246的生物量超过出发菌株219%。对104株诱变菌株进行多糖产量的分析,共得到18株菌株的多糖产量超过出发菌株,其中A-246的产量比出发菌株提高了268%。通过改良液体培养基发现菌株的摇瓶生物量有大幅度的提高,提高生物量最多的是A-351菌株,比原生物量提高了15.4倍。(4)验证了高多糖诱变菌株的遗传稳定性和多样性通过对高多糖菌株的第一代与第十代的生长速度以及其ITS序列的比较,发现第一代与第十代的生长速度没有发生明显的改变,且其ITS基因也未发生改变,说明获得的诱变菌株在遗传上是稳定的。对高多糖诱变菌株进行RAPD多态性分析,结果显示,高多糖诱变菌株的属内遗传相似度在0.5-0.97之间,且通过对诱变菌株菌丝体形态的观察,发现本论文获得的高多糖菌株的遗传多样性较丰富。(5)发现高多糖诱变菌株的具有抗氧化物和刺激巨噬细胞释放NO的生物活性通过测定高多糖菌株清除DPPH自由基的实验,发现诱变株A-482号菌株的抗氧化能力明显高于出发菌株与其他高多糖菌株。通过测定不同菌株水提物刺激巨噬细胞释放NO的作用,发现A-316号菌株的水提物可以诱导巨噬细胞释放更多的NO,说明该菌株调节免疫的能力优于出发菌株与其他高多糖菌株。