胆盐(GCDA)对肝细胞增殖与凋亡影响及其分子机制研究

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目的:通过研究胆盐(GCDA)对正常肝细胞增殖与凋亡的影响,探讨胆盐(GCDA)对正常肝细胞活性影响及其可能分子机制。方法:1.台盼蓝染色检测GCDA对正常肝细胞L02、QSG7701、肝癌细胞HepG2细胞存活率的影响。2.MTT法检测GCDA作用于正常肝细胞L02、QSG7701及肝癌细胞HepG2的影响。3.细胞形态学观察检测经GCDA处理后L02细胞形态的变化。4.Hoechst33258法及DNA ladder法检测经GCDA处理后L02细胞核凋亡的情况。5.免疫荧光法及Western blotting法检测经GCDA作用后L02细胞内Mcl-1及DNA损伤与修复相关蛋白的表达。结果:台盼蓝染色法及MTT法结果表明GCDA作用L02、QSG7701,(?)低浓度时(≤50μM/L)促进细胞增殖,中高浓度时(>50μM/L)抑制细胞增殖;而HepG2细胞在GCDA (0-400μM/L)促进细胞增殖。GCDA处理时间延长,细胞形态明显发生变化且贴壁性降低,细胞数目也明显减少,L02细胞核出现典型的凋亡形态学特征。DNA ladder结果显示L02细胞均出现轻微“梯形"DNA条带。免疫荧光检测可见APE-1、Mcl-1均有表达。Western blotting结果显不GCDA浓度增加Mcl-1表达先上调后下调,Ku70、Ku86等蛋白表达上调。随着GCDA处理L02细胞时间增加,Mcl-1表达下调,Ku70、Ku86等表达上调。结论:GCDA低浓度对正常肝细胞具有促增殖作用,中高浓度具有促凋亡作用。它诱导正常肝细胞发生细胞凋亡的可能机制是通过诱导抗凋亡Mcl-1的表达下调及DNA损伤的发生,两种通路相互作用调节细胞凋亡。
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