禽呼肠孤病毒(ARV)主要感染鸡和火鸡，在鸡群中普遍存在，常与其他疾病混合感染，并引起免疫抑制，导致多种疾病混合感染，临床表现多种病症，导致鸡的生产能力下降及死亡率升高。为了有效的预防和控制ARV，降低其对养禽业的危害，本课题开展了对ARV病毒检测方法的研究，建立了LAMP核酸检测方法及直接免疫荧光的检测方法，并对传统和核酸检测方法进行了比较研究，为临床选择检测方法提供了依据。　　 根据ARV的S1基因序列设计一套LAMP引物，以样品的cDNA为模板，利用Bst DNA大片段聚合酶，在63.5℃恒温条件下进行扩增，扩增后加入SYBR Green I染料直接或在紫外灯下观察判定扩增结果。该方法可检测出ARV标准株Sl133、S1733和地方分离株，具有很好的特异性；最低能检测出l×100个拷贝的pMD-18T-Sl阳性质粒，敏感性很高。该方法无需特殊仪器，简便、快速，适用于禽呼肠孤病毒的临床快速检测。　　 目前已经建立的检测禽呼肠孤病毒核酸的方法有RT-PCR、半套式RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR、RT-LAMP。但尚未有人对这四种方法进行过系统的比较。研究中，通过反复试验，测试出四种方法在检测阳性质粒DNA、病毒RNA时的敏感性差别，RT-PCR最低能检测到l×103个拷贝/ul的质粒，10pg的RNA;半套式RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR、RT-LAMP均能最低检测到1×100个拷贝/ul的质粒，10fg的RNA。由此可以得出，核酸检测方法中，半套式RT-PCR、实时荧光定量RT-PCR、RT-LAMP的敏感度很高。同时，四种方法各有其优缺点，经过系统分析，为禽呼肠孤病毒的临床检测和研究提供选择依据。　　 以原核表达的ARV结构蛋白б3作为免疫抗原接种兔子制备高免血清，采用硫酸铵盐析法提取血清种免疫球蛋白(IgG)，并用异硫氰酸荧光素(FITC)对IgG进行荧光标记，通过对标记抗体的纯化得到F/P值为2.335的标记抗体。优化各反应条件，初步建立了检测ARV的FA诊断方法。用已建立的方法检测感染ARV病毒的单层鸡胚原代成纤维细胞，出现的特异性荧光较多，易于观察，表明FA方法在检测ARV病毒方面有较好的可操作性。将临床分离的疑似ARV感染的病料接种CEF，并用建立的FA方法检测，检出率较高，表明所建立方法可用于临床检测。直接免疫荧光方法具有直观、特异性强的特点，可用于ARV感染的临床检测。