鲈鱼SyntaxinlB基因部分序列克隆与分析

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该实验就以海洋经济鱼类鲈鱼作为实验材料,对Syntaxin 1B基因进行克隆和序列分析.该实验从鲈鱼脑组织中提取总RNA,通过反转录得到cDNA第一条链,根据已克隆出的其它生物的Syntaxin 1B基因序列,设计并合成引物,在cDNA第一条链的基础上使用降落PCR(TD-PCR),进行体外扩增鲈鱼Syntaxin 1B基因的部分序列,得到长度为751bp的片断,在胶中洗脱下该片段,与pMD 18-T载体链接,转化入感受态细胞,挑取阳性克隆扩大培养,提取质粒,经HindIII和X-gal I两内切酶消化得到751bp的片断,证明链接成功.将含有阳性克隆的菌液送出测序,所测序列在NCBI网站上进行BLAST,比对结果证实该序列就是Syntaxin 1B,而且该序列(235个氨基酸)已占Syntaxin 1B全序列(288个氨基酸)的81.59﹪.在该序列中也发现了神经毒素-肉毒杆菌毒素的结合位点,还有Syntaxin 1B与SNAP-25结合的双螺旋区域.使用Megalign和Bioedit等生物学分析软件,对克隆出的鲈鱼的Syntaxin 1B这段序列与已报道的其它生物的Syntaxin 1B序列进行比对,得出该基因在不同生物间存在高度同源性,因此说明SNARE蛋白复合体在海洋经济鱼类鲈鱼的囊泡膜转运中也起重要的调控作用.
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