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目的:探究日本血吸虫(Schistosoma japonicum,SJ)可溶性虫卵抗原SjP40蛋白Th1表位肽P25对SJ尾蚴感染小鼠脾淋巴细胞刺激产生IFN-γ的作用机制,并检测P25多肽分别与弗氏不完全佐剂(Incomplete Freund?s Adjuvant,IFA)和铝佐剂(Aluminum,Alum or Al)联用对OVA诱导小鼠过敏性哮喘的抑制作用。方法:体外实验:SJ尾蚴感染BALB/c雌性小鼠(n=3),分离脾淋巴细胞。研究分为三组:Medium对照组(单纯DMEM培养液培养),P12多肽对照组(含50μg/ml P12多肽的DMEM培养液培养,P12为日本血吸虫虫卵抗原SjP40蛋白中非Th1表位肽),P25多肽组(含50μg/ml P25多肽的DMEM培养液培养,P25为日本血吸虫虫卵抗原SjP40蛋白中Th1表位肽)(n=3)。脾淋巴细胞培养72 h后细胞计数和MTS法检测脾淋巴细胞增殖水平;培养72 h后收集细胞培养上清液,ELISA法检测IFN-γ的分泌水平;培养48 h后收集细胞,流式细胞术分析脾细胞中CD4+T细胞、CD8+T细胞分泌IFN-γ的水平。体内实验:正常BALB/c雌性小鼠随机分为5组:正常对照组,OVA组,OVA+P25组,OVA+P25+Al组和OVA+P25+IFA组(n=6)。将P25分别与IFA、Al佐剂、PBS混合,于第0 d和14 d分别免疫BALB/c小鼠,于第7 d、21 d腹腔注射OVA致敏小鼠,第28~35 d用OVA滴鼻诱发小鼠哮喘,末次诱导结束24 h后取小鼠肺组织,HE染色观察病理改变,AB-PAS染色观察粘液分泌情况;收集肺泡灌洗液(BALF),瑞氏-姬式染色计数嗜酸性粒细胞;ELISA法检测BALF中IL-4和IFN-γ水平;收集血清,ELISA法检测OVA特异性Ig E水平。结果:体外实验:1.细胞计数及MTS法检测细胞的增殖。P25多肽组较Medium对照组T细胞增殖程度明显增加(P<0.05,P<0.001);P12多肽对照组较Medium对照组差异无统计学意义(P>0.05)。2.ELISA法检测脾淋巴细胞诱导IFN-γ的分泌水平。P25多肽组较Medium对照组IFN-γ的分泌水平明显增高(P<0.05);P12多肽对照组较Medium对照组差异无统计学意义(P>0.05)。3.流式细胞分析法检测小鼠脾脏CD4+T细胞和CD8+T细胞中IFN-γ的分泌水平。P25多肽组细胞中分泌IFN-γ的CD4+T细胞、CD8+T细胞比例较Medium对照组显著增加(P<0.05);P12多肽对照组较Medium对照组差异无统计学意义(P>0.05)。体内实验:1.小鼠肺组织HE染色镜检比较肺部炎症反应。正常对照组、OVA组、OVA+P25组、OVA+P25+Al组和OVA+P25+IFA组,肺部病理评分分别为1.01±1.3、13.50±1.04、13.00±1.21、9.07±0.97、7.80±1.23。与OVA组相比,OVA+P25+IFA组和OVA+P25+Al组肺部炎症反应减轻,炎细胞浸润减少,病理评分显著降低(P<0.01)。OVA+P25+IFA组与OVA+P25+Al组比较,OVA+P25+IFA组肺部病理评分显著降低(P<0.05)。OVA+P25组病理评分与OVA组比较则无显著差异(P>0.05)。2.AB-PAS染色后计算支气管上皮粘液分泌面积比例。正常对照组、OVA组、OVA+P25组、OVA+P25+Al组、OVA+P25+IFA组支气管上皮粘液分泌面积比分别为0.78±2.3%、43.5±0.84%、39.2±3.31%、21.07±1.37%、15.8±2.23%。与OVA组相比,OVA+P25+IFA组和OVA+P25+Al组支气管上皮粘液分泌面积比显著降低(P<0.01)。OVA+P25+IFA组与OVA+P25+Al组比较,OVA+P25+IFA组粘液分泌面积比显著降低(P<0.05)。OVA+P25组与OVA组则无显著差异(P>0.05)。3.瑞氏-姬式复合液染色计数BALF中嗜酸性细胞。OVA+P25+IFA组和OVA+P25+Al组较OVA组嗜酸性粒细胞数目显著减少(P<0.01);OVA+P25+IFA组与OVA+P25+Al组比较,OVA+P25+IFA组嗜酸性粒细胞数目显著减少(P<0.05)。OVA+P25组与OVA组比较差异无统计学意义(P>0.05)。4.ELISA法检测小鼠BALF中IL-4和IFN-γ水平。与OVA组比较,OVA+P25+IFA组和OVA+P25+Al组BALF中IL-4水平降低(P<0.05,P<0.01),IFN-γ水平显著升高(P<0.01)。OVA+P25组与OVA组比较差异无统计学意义(P>0.05)。5.ELISA法测定小鼠血清OVA特异性Ig E含量。OVA+P25+IFA组和OVA+P25+Al组与OVA组比较OVA特异性Ig E含量降低(P<0.05)。P25+OVA组与OVA组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.SjP40蛋白中Th1表位肽P25可促进SJ感染小鼠脾淋巴细胞的增殖,促进CD4+T细胞、CD8+T细胞分泌IFN-γ,提示P25多肽可促进Th1相关细胞因子IFN-γ的表达。2.SjP40蛋白中Th1表位肽P25与IFA佐剂或Al佐剂联用明显减轻小鼠肺部炎症,减少嗜酸性粒细胞浸润,降低血清OVA特异性Ig E水平,提示P25与IFA佐剂或Al佐剂联用的重要性。3.SjP40蛋白中Th1表位肽P25与IFA佐剂或Al佐剂联用下调小鼠BALF中IL-4表达水平,上调IFN-γ表达水平,提示IFA佐剂或Al佐剂可增强P25多肽诱导Th1免疫反应,进而抑制小鼠过敏性哮喘。