【摘 要】
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目的 溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种非特异性结肠和直肠炎性疾病,属于炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)中的一种,是诱发炎症性相关结直肠癌的最主要病因。低聚半乳糖(galacto-oligosaccharides,GOS)是一种功能性低聚糖,可以改善肠道菌群,具有多种生物活性。GOS主要由β-半乳糖苷酶通过转糖基化反应合成。然
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目的 溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)是一种非特异性结肠和直肠炎性疾病,属于炎症性肠病(inflammatory bowel disease,IBD)中的一种,是诱发炎症性相关结直肠癌的最主要病因。低聚半乳糖(galacto-oligosaccharides,GOS)是一种功能性低聚糖,可以改善肠道菌群,具有多种生物活性。GOS主要由β-半乳糖苷酶通过转糖基化反应合成。然而,目前报道的具有转糖基活性的β-半乳糖苷酶较少,且活性较低。因此,寻找具有较高转糖基活性的β-半乳糖苷酶用于制备治疗急性溃疡性结肠炎的GOS具有重要意义。方法 用含有X-gal的选择培养基来筛选产β-半乳糖苷酶的海洋菌株,筛菌所用的样品从黄海沉积物表面获得。通过多代筛选,获得高活性菌株,扩增其16S r DNA进行序列分析及重组表达。将获得的β-半乳糖苷酶纯化,并进行性质表征。通过TLC分析β-半乳糖苷酶产生的GOS。用酶法合成的GOS对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的急性溃疡性结肠炎小鼠进行灌胃处理。在饲养期间,每天记录每只小鼠基本情况,并进行评估疾病活动指数(DAI)。3周后收集小鼠结肠组织和脾脏,留取结肠组织进行组织切片分析,研究GOS对小鼠急性结肠炎模型的影响。结果 经16S r DNA基因序列分析鉴定该菌株为交替单胞菌属,命名为Alteromonas sp.QD01。从该菌株中克隆出一个新的β半乳糖苷酶基因(gal2A),该基因属于糖苷水解酶第2家族(GH2)。Gal2A的分子量为117.07 k Da,其最适p H和最适温度分别为8.0和40℃。同时,Gal2A在6.0-9.5的p H范围内显示出广泛的p H稳定性。大多数金属离子能促进Gal2A的活性,特别是Mn2+和Mg2+。TLC显示,Gal2A表现出高转糖基化活性,可以催化牛奶和乳糖中GOS的形成。与DSS诱导的急性溃疡性结肠炎小鼠相比,高剂量GOS和低剂量GOS灌胃预处理后,脾脏质量均显著降低,都明显逆转了DSS引起的体重减轻、DAI指数的增加,改善了结肠缩短的长度和结肠组织学损伤。其中,高剂量GOS效果更显著(P<0.05)。结果表明GOS对小鼠急性溃疡性结肠炎有较好的治疗作用。结论 本研究筛选出一株产β-半乳糖苷酶的海洋细菌,培养重组工程菌,纯化制备重组蛋白,得到一种新的β-半乳糖苷酶(Gal2A)。Gal2A具有较高的转糖基化活性可以产生GOS。GOS在溃疡性结肠炎的治疗中具有潜在应用价值,有望用于医药、食品加工和其他领域。
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