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第一部分BPHL与PML-C间相互作用的体内、外验证目的通过酵母双杂交实验及免疫共沉淀技术验证BPHL与PML-C蛋白之间的相互作用。方法将质粒pACT2-BPHL及pGBKT7-PML-C共同转化AH109酵母菌，利用酵母双杂交实验验证两者在活细胞内具有相互作用。构建重组表达载体PCMV-HA-PML-C和PCMV-myc-BPHL，经酶切鉴定正确后，共转染人胚肾293细胞,利用免疫共沉淀技术验证BPHL与PML-C间的相互作用。结果pGBKT7-PML-C及pACT2-BPHL质粒共转化AH109酵母菌后，可见蓝色阳性克隆。构建的重组表达载体PCMV-HA-PML-C及PCMV-myc-BPHL经双酶切鉴定正确后共转染HEK293细胞，抗HA多克隆抗体免疫共沉淀后，抗Myc单克隆抗体进行免疫印迹蛋白检测，可以检测到PCMV-myc-BPHL的蛋白表达。结论PCMV-HA-PML-C及PCMV-myc-BPHL真核表达载体构建成功，酵母双杂交实验及免疫共沉淀技术证实BPHL与PML-C之间存在着相互作用。第二部分通过CO-IP体外验证BPHL与PML(缺失核定位信号的PML全长)间的相互作用目的利用免疫共沉淀技术验证BPHL和PML之间的相互作用。方法构建能在人胚肾293细胞表达的真核表达载体PCMV-HA-PML和PCMV-myc-BPHL,经酶切鉴定正确后,共转染HEK293细胞,利用免疫共沉淀技术验证BPHL与PML之间的相互作用。结果构建真核表达载体PCMV-HA-PML及PCMV-myc-BPHL，利用双酶切进行鉴定，正确后共同转染人胚肾293细胞，抗HA多克隆抗体进行免疫共沉淀，用抗Myc单克隆抗体进行免疫印迹检测，可以检测到PCMV-myc-BPHL的表达蛋白。结论PCMV-HA-PML和PCMV-myc-BPHL真核表达载体构建成功,免疫共沉淀技术证实PML和BPHL之间存在着相互作用。第三部分BPHL基因si RNA载体的构建及其在NB4细胞中的表达目的构建BPHL基因的si RNA重组载体，观察其对NB4细胞中BPHL表达抑制作用。方法根据si RNA设计原则，合成BPHL基因的si RNA干扰序列，利用分子克隆将其克隆到载体pGPU6上，得到重组的表达载体pGPU6-BPHL-si RNA，转染NB4细胞，经G418筛选后培养，用RT-PCR及Western Blotting技术检测该重组表达载体对NB4细胞中BPHL基因的转录和翻译的影响。结果BPHL基因的干扰载体构建成功；RT-PCR及WesternBlotting技术检测pGPU6-BPHL si RNA载体转染的NB4细胞中的BPHL基因的转录和翻译水平下降。结论构建的pGPU6-BPHL si RNA载体能有效地抑制NB4细胞中BPHL基因转录及翻译水平。第四部分抑制BPHL基因表达对NB4细胞增殖与凋亡的影响目的探讨抑制BPHL基因的表达后对人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞增殖能力及凋亡的影响。方法将pGPU6-BPHL-1.1si RNA重组表达载体、pGPU6-N.1阴性对照载体及pGPU6空载分别转染人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞。利用MTT法检测各转染组细胞的体外增殖活力，流式细胞仪检测各转染组细胞的周期分布及凋亡率结果与空载体对照组及阴性对照组相比，实验组细胞生长速度减慢；各组转染的NB4细胞经处理后，FCM法检测结果显示，与对照组NB4细胞相比，pGPU6-BPHL-1.1si RNA载体转染组NB4细胞的G0/G1细胞比例增大，S期比例降低，凋亡率增大（P均<0.01）。结论pGPU6-BPHL-si-RNA重组载体通过抑制BPHL基因表达，使NB4细胞的增殖能力减弱，细胞周期发生改变，诱导其发生凋亡。