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目的：细胞型Fas相关死亡结构域样白介素-1p转换酶抑制蛋白(c-FLIP)是一类含有死亡效应结构域(DED)的凋亡抑制蛋白,能够抑制肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)介导的细胞凋亡。在人类多种肿瘤中发现其表达增高,其长片段c-FLIP(L)与caspase-8共同参与肿瘤细胞凋亡的调控,与肿瘤发生发展关系密切。本研究检测不同乳腺癌细胞系c-FLIP(L;和caspase-8的基础表达量,应用RNA干扰技术降低乳腺癌细胞中c-FLIP(L)的表达水平,探讨其对乳腺癌TRAIL诱导凋亡的效应和可能发生的机制。方法：1.应用Real time PCR和Western blot检测不同乳腺癌细胞株c-FLIP(L)和caspase-8的基础表达量。2.应用RNA干扰技术降低乳腺癌SK-BR-3和MDA-MB-231细胞中c-FLIP(L)蛋白的表达水平,并用Western blot技术验证其表达。3.降低c-FLIP(L)表达水平后,外源给予TRAIL诱导SK-BR-3和MDA-MB-231细胞凋亡,WST-1法检测细胞活力变化,绘制TRAIL作用的剂量曲线。4.应用流式细胞分析术观察SK-BR-3和MDA-MB-231细胞在TRAIL处理下对照组和转染组凋亡比率的差异。5. Western blot检测对照组和转染组在TRAIL处理下,caspase-8活性裂解片段。结果：1.与正常乳腺细胞HBL100相比较,在不同乳腺癌细胞系中c-FLIP(L)和caspase-8在mRNA和蛋白水平有所不同,选择c-FLIP(L)高表达且存在TRAIL凋亡通路的细胞系SK-BR-3和MDA-MB-231作为实验对象。2.应用RNA干扰技术,转染SK-BR-3和MDA-MB-231细胞后验证c-FLIP(L)蛋白水平下降70%-80%。3.降低SK-BR-3和MDA-MB-231细胞中c-FLIP(L)表达并且经TRAIL处理24h后,与对照组细胞相比,SK-BR-3和MDA-MB-231分别在TRAIL500ng/ml和1000ng/ml时细胞活力抑制明显,差异具有统计学意义。细胞的抑制率出现变化,随着浓度升高抑制率逐渐升高,并呈剂量依赖性。4. c-FLIP(L)表达水平下降后,TRAIL诱导24h,SK-BR-3凋亡细胞比例高达57.91%,MDA-MB-231细胞凋亡比例达32.97%,细胞凋亡比例明显增加,细胞对TRAIL诱导凋亡敏感性增强。5.与对照组细胞相比,TRAIL可诱导c-FLIP(L)降表达的细胞内caspase-8蛋白发生酶切降解,胞浆出现caspase-8p43、p18亚片段,表明c-FLIP(L)降表达后caspase-8发生活化。结论：1.在不同乳腺癌细胞系中,c-FLIP(L)和caspase-8的mRNA和蛋白水平表达有所不同,提示其可能与TRAIL对不同肿瘤诱导反应不同密切相关。2.经WST-1和流式细胞术分析,通过siRNA干扰降低c-FLIP(L)表达,细胞活力明显降低,凋亡细胞比率明显增加。表明c-FLIP(L)降表达的细胞对TRAIL诱导的凋亡敏感性增强,提示c-FLIP(L)在乳腺癌高表达细胞系中具有抑制TRAIL凋亡通路的作用。3.与对照组相比,经转染c-FLIP(L)siRNA序列和TRAIL诱导24h,Western blot检测胞浆出现caspase-8p43、p18亚片段,形成活性caspase-8片段,表明caspase-8发生酶切活化。提示TRAIL诱导c-FLIP(L)降表达的细胞发生凋亡,增强其对TRAIL诱导凋亡的敏感性,可能通过激活caspase-8,进而促进细胞凋亡。